发酵液中氨基氮的测定

1、实验原理

氨基酸中的-NH3+基的pk值常在9.0以上，不能用一般的酸碱指示剂（包括酚酞），以氢氧化钠溶液作滴定测量。但可以用甲醛滴定法测量。在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中氨基相互作用，使滴定终点移至pH9.0左右，在该过程中指示剂酚酞不与甲醛作用。pH9.0正是酚酞的变色范围，因此，可以用酚酞作为指示剂，以氢氧化钠溶液来滴定-NH3+基上的H+，每释放一个氢离子，就相当于一个氨基酸。

R-NH3+ H++R-NH2

R-NH2+2CH3CHO R-N(CH2OH)2 2、实验材料

试剂：1mol/LHCl溶液，标准NaOH溶液，12％中性甲醛，甲基红指示剂，酚酞指示剂

样品：侧孢芽孢杆菌发酵液

仪器：高速离心机、分析天平、碱式滴定管 3、发酵液中氨基氮的测定

（1）将发酵液过滤，取滤液2.5ml于 250ml三角瓶中，加蒸馏水约50ml,加甲基红指示剂2~3滴，加1mol/LHCl溶液1～2滴，使成红色，放置3min.

（2）以标准NaOH溶液滴定至刚好转橙黄色，读取此时滴定管刻度，加入12％中性甲醛10ml，放置5—10分钟。

（3）加入酚酞指示剂1ml，用标准NaOH溶液滴定至呈微红色为终点，读取此时滴定管刻度。两次读数之差即为所耗NaOH毫升数。 （4）计算： NNaOH×VNaOH × 14.01

 NH-N%= × 100 = mg/100ml 2.5

甲基红指示液 取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围 pH4.2～6.3（红→黄）。

酚酞指示剂(0.5%酚酞乙醇溶液):取0.5g酚酞,用乙醇溶解,并稀释至 100mL,无需加水95％的乙醇中 。