奶牛专栏
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高效液相色谱柱前衍生化法检测牛奶中莫能菌素的残留
李燕鹏,杨膺白,李启琳,郭
辉
(广西大学动物科学技术学院,广西
南宁
530004)
近年来,人们对食品安全的关注也愈加重视,各国和国际组织针对畜牧业中抗生素和添加摘要:高效液相色谱是目前应用最多的色剂滥用,以及非法使用违禁药物等现象实施了愈来谱分析方法,具有速度快、分辨率高、灵敏愈严格的监控。特别是对于兽药残留的问题,传统度高、样品量少、容易回收和色谱柱可反复的检测手段已经无法满足目前的要求,一些新的检使用等优点。笔者阐述了用高效液相色谱测技术被应用到这个领域。
检测牛奶中莫能菌素残留的方法,并介绍1莫能菌素及其使用
了相关色谱条件及检测标准。
莫能菌素是白色或几乎白色的结晶性粉末,熔
关键词:高效液相色谱;牛奶;莫能菌素;残留点为103～105℃,难溶于水,易溶于有机溶剂。莫能中图分类号:S816.17
文献标识码:A
菌素是有效的抗球虫药,它能阻碍细胞内外阳离子文章顺序编号:1672-5190(2008)01-0093-02
的传递,使细胞内外离子浓度发生变化,从而影响渗透压,最终使细胞崩解,同时使各种代谢产物的摄取与排泄出现故障,代谢的微环境产生变化。莫用之外,莫能菌素在养牛和养猪业均有广泛用途,能菌素在生产中的应用广泛,除了在养鸡业中的应
我国农业部已批准泌乳期奶牛可添加莫能菌素用收稿日期:2007-10-18
于提高奶产量并增强其免疫应答。但是莫能菌素添基金项目:广西自然科学基金资助项目(桂科攻加于泌乳母牛饲料中是否会在牛奶中有残留,目前0424001-1)。
国内尚未见相关研究报道。因此有必要使用高效液作者简介:李燕鹏(1981—),男,硕士,主要研究方相色谱法等先进手段对牛奶进行检测,以确定乳品向为动物营养。
中是否有莫能菌素残留。
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中药治疗:以理气散郁、通络止痛为主。处方:黄芪境,避免应激现象,防止该病的发生。
60g、
白术45g、五灵脂60g、赤芍80g、炒当归60g、蒲①皱胃疾病通过中药、
西药配合治疗,可达到治黄60g、香附60g、甘草40g,水煎去渣,一次内服。
标又治本的目的。中西药联合治疗,达到了理气,消用中药治疗可视情况决定,病久体虚者加党参、炎、消肿、调节胃肠pH值、强心利尿、恢复皱胃机能黄芪、白术,贫血者加当归、熟地、何首乌,食欲不佳者的作用。
加厚朴、苦参、山楂、神曲等,连用5～7d。
②患牛在发生皱胃溃疡的同时,多在此期间表⑤对于确诊为穿孔型皱胃溃疡者,可视病牛情现不同程度的酮病、酸中毒、低血钙、低血钾等症状,况进行手术修补穿孔。手术选择在右侧腹正中旁切因此在治疗中要根据患牛病情,进行针对继发性酮口或右肋骨弓下斜切口,找到穿孔部位,视穿孔的大病、酸中毒、低血钙、低血钾的治疗,以促进患牛康复。
小进行烟包缝合或内翻缝合,术后常规抗生素治疗。③在治疗皱胃疾病过程中,可使用牛羊四防苗手术治疗对局限性腹膜炎病例有一定的治愈率。(或牛羊三联苗),不仅能预防胃肠道疾病,同时又能4
体会
有效控制皱胃疾病的并发症。
早确诊、早治疗是治疗皱胃疾病的关键,并应及④对穿孔出血型皱胃溃疡并发弥漫性腹膜炎病时调整饲料配方,剔除劣质饲料,加强管理,改善环
例治疗没有确切效果,多建议淘汰病牛。
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高效液相色谱
高效液相色谱(highperformanceliquidchro-matography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,
于20世纪60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法,与经典液相色谱相比具有速度快、分辨率高、灵敏度高、样品量少、容易回收和色谱柱可反复使用等优点。它由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相黏度远远高于气体,为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。
3牛奶中莫能菌素的检测方法3.1
试剂
除特殊注明外所用试剂均为分析纯;水为符合
GB/T6682规定的二级水。莫能菌素(含莫能菌素C36H62O11不得少于90.0%)、甲醇(色谱纯,高效
液相色谱淋洗剂)、2,4-二硝基苯肼(DNP)、三氯乙酸(TAC)、三氯甲烷、乙酸。
莫能菌素标准溶液:
准确称取莫能菌素(以
95%为例)1.0556g溶于100mL甲醛中配置10
●mg/mL标准储备液,加甲醇溶解并稀释成的储备
液,置4℃冰箱中保存,临用前取此储备液用甲醇畜
牧稀释成浓度为10μg/mL的标准工作液。
与饲DNP甲醇溶液:配置1mg/mL的DNP甲醇溶料液。准确称取0.1000g的2,4-二硝基苯肼
科(DNP),溶于100mL甲醇中,定容。
学甲醇-1.5%乙酸水溶液:甲醛和乙酸溶液体积E比为9∶1。1.5%乙酸溶液按15mL乙酸加水至1L-ma配置。三氯乙酸溶液:配置500mg/mL的TAC溶il:cn液。准确称取50.014g三氯乙酸(TAC)溶于100mLmx水中,定容。
ky@待测奶样:50mL奶样加入100mL氯仿,在摇vip.床上振动1h,静置。取氯仿层于离心管中,5000r163.离心10min,吸取700μL上清液于10mL带塞离com
心管中。
3.2仪器
高效液相色谱仪,配有四联泵、柱温箱、紫外检
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测器、色谱工作站。
3.3柱前衍生化
在10mL具塞离心管中分别加入0,5,10,25,100,200μL的莫能菌素标准工作液(10μg/mL),
用甲醇稀释至700mL,向每管中加入100μL三氯乙酸溶液,震荡20s,室温放置10min。再向每管加入200μLDNP甲醇溶液,震荡20s,置于55℃恒温水浴锅中30min取出,冷却后进行检测。衍生化后的溶液总体积为1mL,如发现衍生化液混浊,需10000r离心后,取上清液上机检测。上机后可得到图谱、峰面积及保留时间,根据莫能菌素标准溶液浓度及对应的峰面积可求得标准曲线回归方程与相关系数。向空白奶样中添加不同浓度的莫能菌素标准溶液并衍生化,即可测得回收率及精密度。
3.4色谱条件及检测标准
邓磊等采用以下色谱条件,色谱柱:ODSC18
柱;紫外检测波长:392nm;流动相流速:1mL/min;柱温:室温;进样体积:10μL,测定莫能菌素的保留时间为7.198min。若在莫能菌素的保留时间内,样品中并没有出现最大吸收峰,则可判定样品中没有莫能菌素成分,即奶样中无法检测出莫能菌素的残留。
4小结
总之,高效液相色谱柱前衍生化法操作方法简
单易行,色谱条件容易掌握,测试数据重复性好,回收率高,精密度和准确度都能满足分析要求。另外,柱前衍生化法药品试剂相对便宜,测定方便快捷,易于推广应用。
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