5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌wif1、rassf2a基因表达及细胞凋亡的影响

年月201912ActaMedUnivSciTechnolHuazhonDec.　2019g

、氮杂脱氧胞苷对肺癌W5--2′-IF1RASSF2A基因表达及细胞凋亡的影响∗

李　琪,　程德忠,　杜文峰,　汪小鹏

武汉科技大学附属普仁医院呼吸与危重症医学科,武汉　430081

摘要:目的　观察在肺腺癌S氮杂脱氧胞苷(对WPC-A-1细胞中5--2′-5-Aza-CdR)IF1、RASSF2A基因甲基化状态

,/对照组)SPC-A-1细胞株分为4组,A组为未加药组(B、C、D加药组分别加入3、6、12μmolL的5-Aza-CdR。采用甲基流式细胞学技RASSF2A基因mRNA表达水平差异,Westernblot检测4组细胞WIF1、RASSF2A蛋白表达水平差异,

改变的影响,探讨5-Aza-CdR对肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡的影响及其可能的抗癌机制。方法　将体外培养的人肺腺癌化特异性P方法检测4组细胞WCR(MSP)IF1、RASSF2A基因甲基化状态的差异,RT-PCR法检测4组细胞WIF1、、术检测各组细胞周期及细胞凋亡率的差异。结果　①A组细胞检测出WIF1RASSF2A基因为甲基化状态,B、C、D组均、、、检测出WIF1RASSF2A为去甲基化状态。②肺腺癌SPC-A-1细胞WIF1RASSF2A基因mRNA及WIF1RASSF2A蛋白)。③5表达水平低下,经5其表达水平明显增强(均P<0-Aza-CdR处理后,.05-Aza-CdR处理后的细胞凋亡率较未加药组)。④、均明显提高,差异有统计学意义(均P<0.055-Aza-CdR处理后的D组细胞WIF1RASSF2A蛋白表达水平与细胞凋)。结论　肺癌细胞W、亡率呈正相关(均P<可0.05IF1RASSF2A基因呈甲基化状态,5-Aza-CdR具有明显去甲基化作用,、使W进而促进肺癌细胞凋亡及抑制癌细胞增殖,发挥抗癌作用。IF1RASSF2A基因重新激活表达,

关键词:氮杂脱氧胞苷;5--2′-　WIF1基因;　RASSF2A基因;　去甲基化;　肺肿瘤:/中图分类号:R734.2　　DOI10.3870.issn.1672-0741.2019.06.006j

Effectof5-Aza-CdRonExressionofWIF1andRASSF2AGenepandAotosisinLunancerppgC

DeartmentoulmonoloAiliatedPurenHositalouhanUniversitpfPgy,ffpfWyof,,ScienceandTechnolouhan430081ChinagyW(Abstract　Obective　Toobservetheeffectsof5-aza-2′-deoxctidine5-Aza-CdR)onthemethlationstatuschanesofyyygj

WIF1andRASSF2AinlundenocarcinomacellsSPC-A-1,andtoinvestiatetheeffectsof5-Aza-CdRonaotosisoflund-gagppgaenocarcinomacelllineSPC-A-1anditspossiblemechanism.Methods　TheculturedhumanlundenocarcinomacellsSPC-A-1ga

:(),,(,,/)weredividedintofourgrousgrouodosinroundgroureatedwith3612μmolL5-Aza-CdR.Differ-ppAnggpapBCDt

()encesinWIF1orRASSF2Agenemethlationstatusamonhefourgrousweredetectedbethlation-secificPCRMSP.ygtpymyp

DifferencesinmRNAexressionandproteinexressionofWIF1orRASSF2Ageneamonhedifferentconcentrationgrousppgtp

,,weredetectedbT-PCRandWesternblottinesectivel.FurthermoredifferencesofthecellccleandaotosisrateofyRgrpyypp

fourgrousweredetectedbflowctometr.Results　①WIF1orRASSF2Ageneofsecimensingrouxhibitedmethla-pyyyppAey

,,tionstatuswhilethegroundDexhibiteddemethlationstatus.②ThemRNAandproteinexressionlevelsofWIF1orpBCayp

,RASSF2AinlunancercellsSPC-A-1wereverlowbeforetreatment.After5-Aza-CdRtreatmentthemRNAandproteinex-gcy

()ressionlevelsofWIF1orRASSF2AweresinificantlnhancedP<0.05.③Aotosisrateofdosinrouinificantlin-pgyeppggpsgy

,()creasedcomaredwithnodosinrouhedifferencewasstatisticallinificantP<0.05.④Theproteinexressionlevelsofpggptysgp

()WIF1andRASSF2AingrouerepositivelcorrelatedwiththeaotosisrateP<0.05.Conclusion　WIF1andRASSF2ApDwypp

eneinlunancerhavedefectiveexressionduetomethlation.5-Aza-CdRhasaobviousdemethlationeffect.WIF1andggcpyyRASSF2Ageneexressioncanbereactivatedb-Aza-CdR.5-Aza-CdRpromotesaotosisandinhibitscellproliferationinpy5pp

,lunancerandthusplasaroleincancertreatments.gcy

;Keords　5-Aza-CdR;　WIF1;　RASSF2A;　demethlation　luneolasmsygnpyw

,,LiQiChenezhonDuWenfenetalgDgg

　　肿瘤细胞活性受多种表观遗传学机制缺陷的影

响,肿瘤抑癌基因启动子区域CG岛的高甲基化所p

)2017年武汉市卫生计生委临床医学科研项目(No.WX17Z18

:李　琪,男,医学博士,副主任医师,1978年生,E-mailotimum1212p

∗

引起的基因表达沉默是目前国内外研究最充分的表(是目前体外最常用且作用最强的一种5-Aza-CdR)

甲基化抑制剂,已在血液系统恶性肿瘤化疗中得到部分应用,并取得一定疗效,但在肺癌临床化疗上的

]1-2

。5观遗传学机制缺陷之一[氮杂脱氧胞苷--2′-

@163.com

·662·

华中科技大学学报(医学版)　　2019年12月第48卷第6期

RASSF2A的启动子高甲基化是多种恶性肿瘤形成的一类频繁、共性基因事件,但与此有关的肺癌方面的研究较少。因而,本研究选用抑癌基因WIF1与

探讨5RASSF2A作为靶基因,-Aza-CdR发挥抗肺癌效应的可能机制,以期为肺癌新型化疗方案的探索提供一种新的思路和理论依据。1　材料与方法

1.1　主要实验材料

应用,国内外报道较少。目前研究认为,WIF1与检测产物条带。根据扩增出的产物条带判断DNA是否甲基化,只能用甲基化引物扩增出产物条带者为甲基化的细胞,只能用非甲基化引物扩增出产物WIF1、RASSF2A基因甲基化状态的差异。

1.2.3　RT-PCR法检测用药前后WIF1、RASSF2A基因的mRNA表达变化　收集上述4组细胞株,按T用RIzol试剂盒说明书进行操作,

以2μTRIzol试剂抽提各组细胞总RNA,NAg的R为模板,依据RT-PCR试剂盒说明书进行逆转录合条带者为去甲基化的细胞。比较上述4组细胞

人肺腺癌细胞株胞室。SPC-A-1购自上海中科院细

提试剂盒及甲基化检测试剂盒购自上海生工生物技5-Aza-CdR购自美国Sigma公司。DNA抽术有限公司,eneRNA提取试剂及逆转录试剂盒购自美国G辣Co根po过eia公司。鼠抗人氧化物酶标记羊R抗A鼠R-β蛋白单克隆抗体及国工程San公taC司r合uz公司。各类引物均由I上gG均购于美海生工生物成提供(表双染色法流式细胞检测试剂盒购自美国1)。AnnexinⅤ公司。

I-nFvIitTrCo/gePnI.2　实验方法

.-21.1用含　SP10C-%A-小1细胞培养牛血清、10　人肺腺癌细胞株0U/mL青霉素和SPC-U7/℃mL链霉素的100

、100%饱和湿度的恒温密闭式培养箱RPMI10培养液在5内%C培O2养、。实验采用对数生长期细胞,每瓶3×101000mL3天消化传代传代。取对数1次,细

胞株按每5

/生长期细胞,按每孔接种1×14

个细胞接种于组6个复孔,培养24h后每板选4组(3A组细胞分别加入

、B、C2、4孔细胞

培养板,共4板,每板共接种D组),每μmol/L(B组)、6μmol/L(C组)、组)的(A组5)-,A继续培养za-CdR,,将于加药未加7药12μmol/L(D

2h的细后收集胞株作上为述对各照组组细胞进行实验检测。

后.2.W2I　甲基化特异性PCR(MSP)

方法检测用药前4F1、组R细A胞SS株F2,在A基因甲基化状态的差异酚氯仿异戊醇方法基础　收集上述上用分光光度计检DNA抽提试剂盒抽-提细-利胞基因组测DNA。紫检测饰甲基化检测试剂盒步骤修饰和纯化DNA完整性D。NA量和纯度,琼脂糖凝胶电外泳抽提的DNA按亚硫酸氢钠修物序I列F1及、RWIF1、RASSF2PACSRSFDNA后进行扩增。所设计W反2A基因甲基化引物及非甲基化引应条件见表1NA基因甲基化引物及非甲基化引物。采用对同一样本DA进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳成条件参照国外相关文献cDNA,进行PCR扩增,。用mRNA引物序列及反应析在自动酶标仪PCR产物,

全自动凝胶成像分析系统2%琼脂糖凝胶电泳分扫描分析,基因扩增条带4与90n内参m处测吸光度值(A490),以目的WRβ-actin扩增条带的A490比值

作为m比较上述4组细.I2F.1NA相对表达水平,胞4、R　ASWSeFst2eA的rnblmoRtN检A表达差异。1测用药前后胞株ASS,F各用2A蛋白表达水平的差异PBS洗2次,用蛋白裂解液裂解细胞　收集上述4WI组细F1、R30

Fmiolnin,10酚0℃水浴试剂法1测0蛋mi白n

,浓离度心,去取上SDS-PAGE电泳。电转移至纤维素膜10清0,μ提g取蛋总白蛋进白行。,

纤维素膜置于(一抗)鼠抗人单抗(温孵育2h,4℃过夜,再置于(二1∶抗2)0辣0

)根稀释液中室过氧化物酶标记的羊抗鼠h再室温孵育Ig

G(1∶码凝胶图像分析系统对显影条带进行灰度分析,4℃过夜,2h2000后),稀释液中室温孵育显色。用全自动数2,采用待测条带与相应的作为待测蛋白的相对表达水平β-actin条带的灰度值的比值

,比较上述4组细胞

WIF1、RA　.2收集上述.5　流式细胞术检测各组细胞周期及细胞凋亡率

SSF2A蛋白表达水平差异。

1双染色法流式细胞检测试剂盒说明书进行操作4组培养细胞,按照AnnexinⅤ-FITC,P/溶液洗涤2次细胞,调整细胞浓度为1×106

/mL,37BP℃

SI

温育作液到30m,加入5μm10i0nμL的待测细胞悬液中LAnnexinⅤ-F,I室温避光孵育TC及1μLPI工进行细胞周期及细胞凋亡率分析in。细胞染色后立即上流式细胞仪检测15

。

,Modfit软件1.3　统计学方法

应用均数土标准差SPSS1(x■±7.s0软件进行分析,

计量资料采用分析,两两比较采用)最表示小有,组间均数比较采用方差意义差异法(相关性分析采用LSD法)

,P11A331李　琪等.氮杂脱氧胞苷对肺癌W5--2′-IF1、RASSF2A基因表达及细胞凋亡的影响

表1　PCR所需引物Table1　PrimersforPCR

引物

WIF1基因甲基化WIF1基因去甲基化RASSF2A基因甲基化RASSF2A基因去甲基化

WIF1mRNARASSF2AmRNA

-actinβ

F:5′-GGGCGTTTTATTGGGCGTAT-3′F:5′-GGGTGTTTTATTGGGTGTAT-3′F:5′-CGAAGGAGGGCGGGGAGACT-3′R:5′-AAACCAACAATCAACGAAC-3′)序列(5′-3′

)长度(bp197198148154188140186

·663·

退火(℃)58565856575856

R:5′-AAACCAACAATCAACAAAAC-3′R:5′-TCCGCCGCCGTCTTCTAAACG-3′

F:5′-GTTTTGAAGGAGGGTGGGGAGATT-3′F:5′-CCGAAATGGAGGCTTTTGTA-3′F:5′-TACAGCGGCCAAACCATGAC-3′F:5′-TGGCACCCAGCACAATGAA-3′R:5′-TGGTTGAGCAGTTTGA-3′

R:5′-AATCCACCACCATCTTCTAAACA-3′

R:5′-CTCATCTCATCTGAGCGAAGCAAG-3′R:5′-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3′

2　结果

2.1　各组WIF1、RASSF2A基因的甲基化状态比较

MSP方法检测表明,A组SPC-A-1细胞检测

出W经不同IF1、RASSF2A基因均为甲基化状态,

浓度5-Aza-CdR处理72h后的B、C、D组检测出WIF1、RASSF2A均发生去甲基化。见图1及图2。

D组检测出RASSF2A发生去甲基化

A:A组标本检测出RASSF2A基因为甲基化状态;B、C、D:B、C、

图2　各组RASSF2A基因甲基化状态

:甲基化泳道;去甲基化泳道;M:U:MarkerDNA分子量参照物;

Fi.2MethlationstatusofRASSF2Ageneineachgrouypg

2.2　各组细胞WIF1、RASSF2A基因的mRNA及蛋白表达水平的比较

A:A组标本检测出WIF1基因为甲基化状态;B、C、D:B、C、D组检测出WIF1发生去甲基化

图1　各组WIF1基因甲基化状态

:甲基化泳道;去甲基化泳道;M:U:MarkerDNA分子量参照物;

随Aza-CdR的D组mRNA及蛋白表达水平最高,

着5-Aza-CdR的处理浓度加大,mRNA及蛋白表达,水平逐渐提高(均P<0.05)5-Aza-CdR量效有一定的相关性。见表2。

　　4组中,A组的2种基因mRNA及蛋白表达水

,/平均最低(均P<0加入1.05)2μmolL浓度5-

Fi.1MethlationstatusofWIF1geneineachgrouypg

(,)Table2　ComarisonofmRNAandproteinexressionlevelsofWIF1andRASSF2Agenesineachgroux■±sn=24ppp

组别ABCD

WIF1mRNA0.32±0.15

a

0.79±0.20

,)表2　各组WIF1、RASSF2A基因的mRNA及蛋白表达水平的比较(x■±sn=24

RASSF2AmRNA0.16±0.10

a

0.99±0.15

0.17±0.11

WIF1蛋白RASSF2A蛋白0.10±0.06

a

0.49±0.12

ab

1.28±0.17

abc1.85±0.16

ab

1.45±0.26

a

0.39±0.15

abc

2.03±0.25

ab

0.71±0.18

abc0.99±0.13

ab

0.77±0.16

abc0.95±0.11

abc与B组比较,与C组比较,　　与A组比较,P<0.05;P<0.05;P<0.05

·6·

华中科技大学学报(医学版)　　2019年12月第48卷第6期

2.3　各组细胞周期及细胞凋亡率的比较

,显著性上升(均P<0其中D组细胞凋亡率最.05)高,为(17.45±1.82)%。随着5-Aza-CdR处理浓

加药组与未加药组比较,细胞总体凋亡率均有

/度的升高,处于GGP<01期的细胞比例明显上升(

),/处于S期或G0.05M期的细胞比例明显下降2(,表明5P<0.05)-Aza-CdR可将癌细胞增殖阻滞/。于GG01期。见表3及图3

,Table3　Comarisonofcellccleproortionandaotosisrateineachgroufter72htreatmentwith5-Aza-CdR(x■±s%)pyppppa组别ABCD

总体凋亡率

a

13.55±1.13a14.87±1.90abc17.45±1.82

,表3　5-Aza-CdR处理72h后各组细胞周期比例及细胞凋亡率的比较(x■±s%)

/GG01期

S期

8.19±0.7762.09±3.20

a

69.16±3.49a72.94±3.55abc77.65±3.13

21.90±2.16

a

17.53±2.02a15.28±1.60abc13.10±1.35

16.01±1.30

/GM期2

a

13.31±1.77a11.78±1.13abc9.25±1.52

abc与B组比较,与C组比较,　　与A组比较,P<0.05;P<0.05;P<0.05

左下象限显示活细胞,为A左上象限显示坏死细胞,为A右上象限显示晚期凋亡LL:nnexinⅤ-/PI-;UL:nnexinⅤ-/PI+;UR:细胞或凋亡继发性坏死细胞,为A右下象限为早期凋亡细胞,显现AnnexinⅤ+/PI+;LR:nnexinⅤ+/PI-。UR与LR率之和为总体凋亡率。A组:UL1.81%,UR4.%,LL90.00%,LR3.55%;B组:UL0.75%,UR7.63%,LL85.70%,LR5.92%;C组:

图3　流式细胞仪检测不同浓度5-Aza-CdR对细胞凋亡率的影响

UL1.84%,UR7.93%,LL83.29%,LR6.94%;D组:UL2.45%,UR8.76%,LL80.1%,LR8.69%

Fi.3Effectof5-Aza-CdRwithdifferentconcentrationonaotosisrateblowctometrppyfyyg

2.4　WIF1、RASSF2A蛋白表达水平与细胞凋亡率的相关性

后,D组细胞WIF1、RASSF2A蛋白表达水平均与

,细胞凋亡率呈正相关(均P<0r=0.92,0.73,.05)表明WIF1与RASSF2A蛋白能促进癌细胞凋亡。

见图4、5。

取上述3板D组细胞,经5-Aza-CdR处理72h

图5　RASSF2A蛋白表达水平与细胞凋亡率呈正相关Fi.5TheexressionlevelofRASSF2Aproteinwaspositivelpyg

correlatedwithaotosisratepp

3　讨论

近年来研究认为,经去甲基化制剂干预癌变细

图4　WIF1蛋白表达水平与细胞凋亡率呈正相关

Fi.4TheexressionlevelofWIF1proteinwaspositivelorre-pycg

latedwithaotosisratepp

胞后,可逆转癌细胞内抑癌基因DNA的甲基化状态,使得封闭的基因重新表达,从而恢复其正常功Aza-CdR作为去甲基化制剂对体外培养的人肺腺

3]

。本研究选用5能,达到抑制肿瘤进展的目的[-

李　琪等.氮杂脱氧胞苷对肺癌W5--2′-IF1、RASSF2A基因表达及细胞凋亡的影响

·665·

癌细胞系S运用MPC-A-1进行处理,SP检测技术

初步探讨在SPC-A-1细胞中5-Aza-CdR对抑癌基因WIF1、RASSF2A甲基化状态改变的影响。结果发现,未加5对照组)检测出-Aza-CdR的A组细胞(证实了肺WIF1、RASSF2A基因均为甲基化状态,腺癌细胞内WIF1、RASSF2A均存在DNA高甲基显著高于癌旁组织的WIFl甲基化率是47.5%,

[]

20.9%4,WIFl启动子高甲基化作为表观遗传学行癌基因均处于去甲基化状态,其mRNA及蛋白表达。有研究也水平较A组也显著升高(均P<0.05)化状态的R可重新恢复ASSF2A发生去甲基化,

[][0]

的研究也mRNA的表达9。Ramachandran等1证实WIF1启动子高甲基化直接导致WIF1基因表

达下调,这一现象是宫颈癌发生的早期事件,通过5-Aza-CdR去甲基化处理后,WIF1基因重新恢复表达。上述研究均进一步证实了甲基化状态与抑癌基因转录及蛋白表达水平密切相关。推测可能是通发现,卵巢上皮癌细胞经5甲基-Aza-CdR作用后,

化状态。国外也有研究发现,NSCLC肿瘤组织的

为是恶性肿瘤形成的一个早期、频繁的基因事件。

同样,较多研究表明在肺癌、结直肠癌等恶性肿瘤中也检测到抑癌基因状态[5-6]

。本研究结R果AS还SF发2A启动子的普遍甲基化dR处理72h后的B、C、D现,组经(不实同验浓组度)检5-测Az出a-

W度的IF1B、R组也产生了去甲基化条带ASSF2A均为去甲基化状态。给予最低浓。表明对癌细胞内的抑癌基因DNA具有明显去甲基化作

5-Aza-CdR

用。国内也有研究证实,应用起抑癌基dR就能抑制肺癌因的去甲基A5化49细胞1内μ,发挥抗癌DmNMTol/L的效应[s活5-性A,za引-7

]dR为正常胞嘧啶核苷的类似物,

它可以渗入到细。5-Aza-

胞内,转化为脱氧核苷三磷酸,并在程中替代正常的胞嘧啶核苷酸掺入到延伸的DNA复制的过链中。推测N5-Aza-CdR可能主要是通过掺D入N到

A

竞争A链中与性地共D价NA序列上结合活性,从而抑制甲基基D团NMTCp

继续sG二核苷酸的胞嘧啶与,降D低NA了序DNMT列上s的胞嘧啶环的结合,发挥去甲基化作用。

本项研究还分别运用技术从RT-PCR及Wester-Aza-CRdNRA水平及蛋白水平研究不同作用浓度的nblot

对WIF1、RASSF2A表达水平的影响。

结果显示,ASSF2A4组中,未加药)mRNA及蛋白A组的表达水2种基因(平最低(

均WI.05),加及蛋白表达水平最高入12PF1<、μmol/L浓度,5-Aza-CdR的m用浓度加大RNA,<0mRNA及蛋白表达水5-平A逐za-渐Cd提RD组随着的作高(均国内也N.A05及蛋),5-白A表za-达Cd水R量效有一定的相关性,

即mR平具有一定的浓度依赖性。有研究发现,高浓度ASSF1AmRNA表达水平5明-A显za高-C于dR处理组的

低浓度组及未处理组,有剂量依赖性5-Az[8a]

-。Cd此外R去甲基化效力在一定范围内析,未经5-Aza-,结合上述MSP检测结果分

,C其dR处理的而经5-Azam-RCdNRA及蛋白表达水平微弱或明A组2种抑癌基因均处于甲基化状态显低下,处理后的B、C、D组2种抑

过5-Aza-CdR的去甲基化作用使原先因处于甲基化状态导致表达缺陷或沉默的抑癌基因恢复到去甲基化状态,从而使其转录水平及蛋白表达水平上调,进而恢复抑癌基因的正常功能,重新发挥抑癌作用。此外,本研究通过流式细胞术观察不同浓度Aza-CdR对肺腺癌5-结果显示SPC-A-1细胞增殖、凋亡及细胞周期变化的影响。,药A组比较,癌细胞总体凋亡率均有显著性升高B、C、D加药组与未加(<0.05);加入12Pμmol/L浓度的D组癌细胞总体凋亡率最高((P<0.05胞术散点图);也浓度越高17.45±1显示随,.着促凋亡效果越明显82)%,差异有统计。学流式细意义高,右下象限的早期凋亡细胞相对数量也逐渐增多5-Aza-CdR处理浓度的升。以上研究数据表明作用,且呈浓度依赖性5-A。za此外-CdR有促进癌细胞凋亡

,流式细胞仪检测结果

还发现,随着G5-Aza-CdR处理浓度的升高,处于G0

/G1期的细胞比例明显升高(

Az2/MP<0.05期的细胞比例明显下降(),处于a-CdRP<0.05可掺入到癌细胞主要)作,推S期或用测于5期及S-LiuD等NGA2合成前期M期的细胞,将癌细胞生长周期循环阻滞DNA中,

于/,具有明显抑制细胞增殖的作用。[11]

也用流式细胞术检测肺癌H1975细胞凋

亡及细胞周期变化,发现化作用重新激活TMEM159-6A基因的表达za-CdR可通过去甲基

,致使细胞周期循环阻滞,从而诱导H1975细胞的凋亡。

A甲基化而表达沉默的rcher[12]

的研究认为5-Aza-CdR可使因Cp

G岛高癌细胞的增殖/凋亡失衡SOD纠正肺。2基因重新激活,上述国内外相关研究均进一步支持了本研究的结果,表明作用于S期及5-Aza-CdR主要亡。另外GG2

/M期的癌细胞,将细胞周期循环阻滞于0,/本研究还发现G1期,可明显抑制细胞增殖,促进细胞凋,白表达水平均与细胞凋D组亡率W呈IF正1、相RA关SS(F均2A蛋

.05),表明WIF1、RASSF2AP<蛋白有诱导细胞凋亡

的作用。国内有类似研究,表明去甲斑蝥素作为另

CCCDC05R0PR·666·

华中科技大学学报(医学版)　　2019年12月第48卷第6期

[],()3　YuDH,WaterlandRA,Zhanetal.Taretedp16Ink4aei-gPgp

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ctidineoncellroliferationofnon-smallcelllunancercellypgc

[]lineA549cellsandexressionoftheTFPI-2geneJ.Asianp

起到抑制细胞生catenin信号通路异常激活被阻断,

13-14]

。以上进一步证实了长、诱导细胞凋亡的作用[本研究的结果,即5-Aza-CdR可通过去甲基化作用上调W推测WIF1蛋白表达,IF1表达升高可能阻

/断了Wn促进癌t-catenin信号通路的信号传递,β细胞凋亡,发挥抗肺癌效应。另有学者分别用均EZH2抑制剂及5-Aza-CdR作用于乳腺癌细胞,

可使RASSF2A表达水平上调,RASSF2A蛋白抑一种去甲基化剂可激活高甲基化状态的WIF1重新

/表达蛋白,使得神经胶质瘤或NSCLC的Wnt-β

制亡[K-RAS活性,

进而抑制细胞生长、诱导细胞凋15

]化。这与本研作用可使究SSF2A的表达R一起证实了5-Aza-CdR通过去

甲基推测升A高SS进F2一A蛋白表达上调,

A步抑制了K-RAS介导的细胞生长信号传导通路,从而发挥抑癌效应。总之,肺癌高甲基化出现表W达IF缺1、陷R,ASSF2A抑癌基因因D的5W-IAFz1a-、CRdAR通过去甲基N化A作用可重新激活沉默SSF2A基因,从而使其癌细胞凋亡来实现抗癌作用mRNA及蛋白表达水平明显上调,进而诱导。通过探索的抗肿瘤作用机制,可能为今后肺癌的综合治疗提5-Aza-CdR

供新的方法和理论依据。

参　考　文　献

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