中华临床医师杂志（电子版）２０１２年８月第６卷第１５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａｕｇｕｓｔ １，２０１２，Ｖ０１．６，Ｎ０．１５ ２９・ ・论著・ ＰＩ３ Ｋ—Ａｋｔ信号通路在胰岛素生长因子一１ 诱导平滑肌细胞中的作用 郄鹏黄建赖轶权尤文俊 【摘要】 目的 比较胰岛素生长因子一１（ＩＧＦ一１）对人脐静脉平滑肌细胞（ＨＵＶＳＭＣ）和脐动脉平滑肌细 胞（ＨＵＡＳＭＣ）增殖的影响并探讨其机制。方法采用人源ＨＵＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＭＣ进行研究，噻唑蓝（ＭＴｒ）法 检测ＩＧＦ－１对两种细胞增殖的影响，并通过Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ技术检测ＩＧＦ一１对两种细胞中ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ信号通路的 影响。结果不同浓度的ＩＧＦ．１对ＨＵＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＭＣ的增殖都有明显的促进作用，但对ＨＵＶＳＭＣ的促增 殖作用明显高于ＨＵＡＳＭＣ。进一步检测ＰＤＫ－Ａｋｔ信号通路，ＩＧＦ－１可激活ＰＤＫ－Ａｋｔ信号通路，并且ＩＧＦ一１对 ＨＵＶＳＭＣ的激活明显强于ＨＵＡＳＭＣ。ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ（渥曼青霉素）明显抑制ＩＧＦ．１对细胞增殖的促进作用。 结论ＩＧＦ一１可明显促滑肌细胞增殖，并且在ＨＵＶＳＭＣ更为明显；ＩＧＦ一１主要通过激活ＰＩ３Ｋ．Ａｋｔ信号通 路来促滑肌细胞的增殖。冠状动脉搭桥术（ＣＡＢＧ）后静脉移植物比动脉移植物更容易发生内膜增生的 原因可能就在于此。 【关键词】胰岛素样生长因子Ｉ；脐静脉；脐动脉；肌细胞，平滑肌； 内膜增生；ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＰＤＫ－Ａｋｔ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ＩＧＦ－１ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｐｒｏｌｆｉｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ Ｑｍ ，ＨＵＡＮＧ Ｊｉａｎ， ，Ｙｉ—ｑｕａｎ，ＹＯＵ Ｗｅｎ－ｊｕｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｘｉａｍｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｍｅｎ ３６１０００，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＹＯＵ Ｗｅｎ－ｊｕｎ，Ｅｍａｉｌ：ｙｗｊ４５５９＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ．ｃａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ一１（ＩＧＦ－１）ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ（ＨＵＶＳＭＣ）ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ａｒｔｅｒｙ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ（ＨＵＡＳＭＣ） ｎｄ ｉａｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＨＵＶＳＭＣ ａｎｄ ＨＵＡＳＭＣ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｕｓｉｎｇ ＭＴＦ ｎｄ ｐｈｏａｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ３一ｋｉｎａｓｅ（ＰＩ３Ｋ）一Ａｋｔ（ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｂ）ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈ Ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＩＧＦ一１ Ｃａｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＵＶＳＭＣ ａｎｄ ＨＵＡＳＭＣ ｂｕｔ ｔｈｉｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ＨＵＶＳＭＣ ｔｈａｎ ＨＵＡＳＭＣ．Ａｎ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＩ３Ｋ—Ａｋｔ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＨＵＶＳＭＣ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ＩＧＦ一１ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｌｏｗｅｒ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ＨＵＡＳＭＣ．Ｔｈｉｓ ｅｆｆｅｃｔ Ｗａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＩＧＦ一１ ｃａｎ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＭＣ ａｎｄ ｔｈｉｓ ｅｆｆｅｃｔ ｉｓ ｇｒｅａｔｅｒ ｉｎ ＨＵＶＳＭＣ ｔｈａｎ ＨＵＡＳＭＣ；ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＧＦ一１ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＭＣ ｉｓ ｍａｉｎｌｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ＰＤＫ—Ａｋｔ．Ｔｈｉｓ ｍａｙ ｅｘｐｌｉｎ ｔｈｅ ｇａｒｅａｔｅｒ ｐｒｏｐｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｖｅｉｎ ｃｏｎｄｕｉｔｓ ｔｈａｎ ｔｈｅ ａｔｅｒｙ ｔｏ ｕｎｄｅｒｇｏ ｉｎｔｉｍａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ＣＡＢＧ（ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｂｙｐａｓｓ ｒａｆｇｔｉｎｇ）． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｉｎｓｕｌｉｎ・ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ｉ； Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎｓ； Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ａｒｔｅｒｉｅｓ； Ｍｙｏｃｙｔｅｓ，ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ； Ｉｎｔｉｍａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ；ＰＩ３Ｋ—Ａｋｔ 冠状动脉旁路移植术（ＣＡＢＧ）术后血管再狭窄是 影响搭桥术远期效果的主要原因。ＣＡＢＧ术后一年，高 达２０％的静脉移植物闭塞，随后闭塞率为每年４％，１０ 年后只剩余５０％静脉移植物通畅，而ＣＡＢＧ术后１０年 酶（ＰＩ３Ｋ）一Ａｋｔ／蛋白激酶Ｂ（ＰＫＢ）是细胞内重要的信号 通路，影响细胞生长、分化和迁移 引。本实验用胰岛素 生长因子．１（ＩＧＦ一１）介导ＨＵＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＭＣ细胞 ＰＩ３Ｋ—Ａｋｔ信号途径活化，探讨ＩＧＦ．１／ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通 路在内膜增生中的潜在机制。 材料和方法 １．材料：ＨＵＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＭＣ购自美国ＡＴＣＣ；胎 ８０％的动脉移植物仍保持通畅ｕ Ｊ。很多因素可以影响 静脉移植物远期通畅率，其确切机制仍存在很大争议。 血管平滑肌细胞的增殖和迁移在静脉移植物再狭窄发 生中起了重要作用，因此成为探索热点 引。磷脂３激 牛血清、ＤＭＥＭ购自Ｇｉｂｃｏ；ＩＧＦ一１购自ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ；ＭＴｒ、 ＤＯＩ：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－０７８５．２０１２．１５．０１１ ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ购自Ｓｉｇｍａ；细胞裂解液（ｐｒｏｔｅｏＪＥＴ Ｍａｍｍａ． １ｉａｎ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓｉｓ Ｒｅａｇｅｎｔ）购自Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ；ＩＧＦ．１Ｒ抗体、 作者单位：３６１０００厦门大学附属第一医院心脏外科 通讯作者：尤文俊，Ｅｍａｉｌ：ｙｗｊ＠ｓｉｎａ．ｔｏｍ．ｃｎ ＰＩ３Ｋ及磷酸化抗体、Ａｋｔ及磷酸化抗体、１３－ａｅｔｉｎ抗体、 年 第亘卷第ｌ５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ（Ｅ１ｅｅｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ）．Ａｕｌ￣：ｕｓｔ１．２０１２．Ｖｏ１．６．Ｎｏ．１５ 二抗购自ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏ ２。ＨｕＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＭＣ细胞培养：细胞用含 １０％胎牛血清的ＤＭＥＭ，在３７ ，５％ＣＯ 培养箱中培 养。细胞聚集到皿底的８０％～９０％时，按１：３的比例传 代，实验使用３—６代细胞。 ３．分组：剂量效应组：２Ｏ ｒ，ｇ／ｒ，ｌｌ ＩＧＦ一１，５０ ｎｇ／ｍｌ 不再增强。ＩＣＦ一１促进细胞增殖方面的作用在ＨＵ． ＶＳＭＣ表现更明显，而ＨＵＡＳＭＣ则较弱。 表１不同浓度的ＩＧＦ．１作用于ＨＵＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＭＣ ２４ ｈ 细胞计数（×１０ 几， ±ｓ，ｎ＝３） ＩＧＦ一１，１００ ｎｇ／ｍｌ ＩＣＦ一１，２００ ｎｇ／ｍｌ ＩＧＦ一１。时间效应 组：分别为加入ＩＧＦ．１（１００ ｒｉｇ／ｍ１）后０．５ ｈ，２ ｈ，４ ｈ， １２ ｈ，２４ ｈ。 ４．细胞计数：将ＨＵＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＭＣ以５ ｘ １０ 细胞／孔接种于２４孔板中，１０％ＦＢＳ的ＤＮＥＭ孵育 ２４ ｈ，饥饿处理（无血清ＤＭＥＭ孵育）２４ ｈ。按分组加 入不同终浓度的ＩＧＦ．１，作用２４ ｈ。用０．１％胰蛋白酶 消化细胞，在倒置显微镜下用细胞计数板计数。实验 一式三份，重复三次。 ５．ＭＴｒ：将ＨＵＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＭＣ以５×１０ 细胞／ 孔接种于９６孔板中，适当处理一定时间后，并加入不 同浓度的ＩＧＦ．１，继续培养１２ ｈ，预先设有空白对照组 及抑制剂（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）组。取出９６孔培养板，每孔加 入１０ ｌ ＭＴｒ（５ ｍｇ／ｍ１），３７℃继续孵育４ ｈ后，每孔加 １００ 二甲基亚砜（ＤＭＳＯ），振荡１０ ｒａｉｎ，在酶标仪上 测定各孔光吸收值（５７０ ｎｍ）。实验一式三份，重复 三次。 ６．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ：ＩＧＦ一１通过与细胞表面受体ＩＧＦ一 １Ｒ结合，激活细胞内影响细胞生长和增殖的有关信号 通路。我们通过Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ技术测定两种平滑肌细 胞中ＩＧＦ．１Ｒ的表达及ＰＩ３Ｋ—Ａｋｔ信号通路的激活。经 过适当的处理和一定的时间后，两种细胞用冰冷的 ＰＢＳ洗和胰酶消化，细胞悬液及上清液离心（３００ Ｘ ｇ） ５ ｒａｉｎ。添加１００ ｌ冰冷的细胞裂解液来裂解细胞。 该裂解物在４℃下离心（１４ ０００×ｇ）１０ ｒａｉｎ，收集上清 （蛋白裂解物）保存于一７０ ｏＣ。ＢＣＡ试剂盒法测定该 裂解物蛋白浓度。凝胶电泳分离蛋白，并在电转液中 将蛋白转移至ＰＶＤＦ膜，相应的抗体孵育ＰＶＤＦ膜。最 后显色，扫描胶片，蛋白带显色密度用Ｓｃｉｏｎ Ｉｍａｇｅ软件 分析。实验重复五次。 ７．数据统计：所有数据用ＳＰＳＳ １１．０统计软件进 行单因素方差分析，组间进行ｔ检验，结果用均数±标 准差（ ±ｓ）表示，Ｐ＜０．０５表示有统计学差异。 结 果 １．ＩＧＦ．１对ＨＵＶＳＭＣ和ｔｔＵＡＳＭＣ增殖的影响（表 １）：通过细胞计数提示低浓度的ＩＧＦ一１对ＳＭＣ即有促 增殖作用，随着其浓度的增高，ＩＧＦ－１对ＳＭＣ的促增殖 作用也增强，但是到达一定的浓度（１００ ｎｇ／ｍ１）后作用 注：ＨＵＶＳＮＣ：与对照组比较，不同浓度的ＩＧＦ一１对ＨＵＶＳＮＣ有促进 增殖的作用，Ｐ＜０．０１。ＨＵＡＳＭＣ：与对照组比较，不同浓度的ＩＧＦ一１对 ＨＵＡＳＭＣ有促进增殖作用（Ｐ＜０．０１），但程度弱于ＨＵＶＳＭＣ（Ｐ＜Ｏ．０１） 进一步实验ＭＴｒ提示不同浓度的ＩＧＦ．１均可明显 促进ＳＭＣ增殖（与对照组相比，Ｐ＜０．０１），呈一定范围 内的剂量依赖关系。并且ＩＧＦ一１的促进作用在ＨＵ— ＶＳＭＣ更显著（Ｐ＜０．０１）。见表２。 表２不同浓度的ＩＧＦ一１作用于ＨＵＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＮＣ ２４ ｈ ＭＴｒ实验（面±ｓ，ｎ：３） ２．ＰＩ３Ｋ—Ａｋｔ信号通路检测：如图１所示：ＨＵＶＳＭＣ 细胞中，ＩＧＦ．１诱导后ＩＧＦ．１ｔｔ的表达水平随着时间的 增加而增加，１２及２４ ｈ最明显，而ＨＵＡＳＭＣ仅在４ ｈ 有一定程度的增加，并且这种刺激效应不能持续。 进一步检测ＰＩ３Ｋ．Ａｋｔ，如图２，３所示：ＨＵＶＳＭＣ 中，ＩＧＦ一１诱导ｐ－ＰＩ３Ｋ、Ｐ．Ａｋｔ表达，１２ ｈ达到最大程度， 甚至持续到２４ ｈ。而在ＨＵＡＳＭＣ，ＩＧＦ．１的诱导作用在 ２ ｈ比较明显，并且这种作用不能持续，ｐ－ＰＩ３Ｋ，ｐ－Ａｋｔ 在１２ ｈ的时候下降到正常水平甚至更低。ＩＧＦ一１诱导 平滑肌细胞ＰＩ３Ｋ磷酸化，也存在一种剂量依赖效应 （图４）。ＨＵＶＳＭＣ的明显效应在一个低剂量时就开始 了，比ＨＵＡＳＭＣ更敏感。 ３．ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ对ＩＧＦ．１诱导的平滑肌增生的作 用：特异性的ＰＩ３Ｋ抑制剂ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ抑制ＰＩ３Ｋ的活 性。如图５所示，ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ（２０￣ｍｏｌ／Ｌ）预处理ＨＵ－ ＶＳＭＣ和ＨＵＡＳＭＣ后，抑制了ＩＧＦ．１的促增殖作用。 讨 论 ＩＧＦ．１参与蛋白合成、细胞迁移和有丝，是血 中华临床医师杂志（电子版）２０１２年８月第６卷第１５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａｕｇｕｓｔ１，２０１２，Ｖ０】．６，Ｎｏ．１５ 管平滑肌细胞、成纤维细胞和巨噬细胞的存活因子 。 激活ＩＧＦ一１受体会触发多种信号通路，这些通路可诱导 平滑肌细胞的生长、分化和迁移 制。新生内膜细胞由 于ＩＧＦ—ｌＲ的高表达，对环境的改变会更敏感 。在本 实验发现ＩＧＦ．１介导的ＩＧＦ一１Ｒ上调在ＨＵＶＳＭＣ要比 ＨＵＡＳＭＣ明显。 静脉移植物内膜增生的原因 。搭桥术后，剪切力是 激活平滑肌细胞中Ａｋｔ磷酸化的始动因素，是触发内 膜增生的一个途径［１ 。本实验中ＰＩ３Ｋ抑制剂ｗｏｒｔ－ ｍａｎｎｉｎ抑制了ＩＧＦ．１介导的增殖效应，这表明ＩＧＦ一１通 过ＰＩ３Ｋ—Ａｋｔ信号通路导致平滑肌细胞增生，并最终导 致血管狭窄。 静脉移植物衰败是一种常见的临床问题，许多生 ＰＩ３Ｋ Ａｋｔ通路对ＳＭＣ增殖非常重要，是导致内膜 增生和移植物衰败的关键因素－８ Ｊ。另有研究证明静脉 平滑肌细胞中，随着时间变化ｐ－ＰＩ３Ｋ递增，在４ ｈ增 加，并持续２４ ｈ，但是动脉平滑肌细胞确没有此效 应 Ｊ＿。本实验发现ＩＧＦ．１刺激后，ＨＵＶＳＭＣ中ＩＧＦ－１ Ｒ、 ｐ－ＰＩ３Ｋ、Ｐ．Ａｋｔ在数量和时间上显著增加，而ＨＵＡＳＭＣ 长因子和细胞因子参与了增生信号的传导，最终导致 平滑肌细胞增殖。本研究提示：与动脉相比，静脉平滑 肌细胞中激活的ＩＧＦ一１Ｒ、Ｐ－ＰＩ３Ｋ、Ｐ－Ａｋｔ的量更多，时间 更长。因此阐明ＰＩ３Ｋ—Ａｋｔ信号通路的表达及其对人动 脉和静脉移植物的作用，将可能在有效治疗静脉移植 物相关疾病方面提供新的方法。 （本文图片及参考文献见光盘） （收稿日期：２０１１－１２－２８） 则较弱，这可能揭示搭桥术后静脉移植物内膜增生的 潜在机制。 随传代次数增加细胞表型会发生明显变化Ｌｌｍｕ Ｊ， 因此本实验采用的是３～６代平滑肌细胞。静脉和动 脉平滑肌细胞血管组织学及生化组成上的差异可能是 （本文编辑：戚红丹） 郄鹏，黄建，赖轶权，等．ＰＩ３Ｋ—Ａｋｔ信号通路在胰岛素生长因子一１诱导平滑肌细胞中的作用［Ｊ／ＣＤ］．中华临床医师杂志：电子版，２０１２，６（１５）：４２０７一 ４２１０ ・消息、・ 《中华老年多器官疾病杂志》欢迎投稿、订阅 《中华老年多器官疾病杂志》是由中国人民总医院主管，总医院老年心血管病研究所主办的医学学术期刊，创刊于 ２００２年６月，双月刊，由王士雯院士任总编辑，国内多学科知名专家组成编委会。 本刊已被评定为中国科技论文统计源期刊（中国科技核心期刊），自２００４年起（用刊为２００３年）收入国家科技部中国科技论文 与引文数据库（ＣＳＴＰＣ）、中国学术期刊综合评价数据库（ＣＡＪＣＥＤ）、中文科技期刊数据库（全文版）、中国期刊全文数据库（ＣＪＦＤ）、 《中国生物学文摘》和中国生物学文献数据库及“万方数据数字化期刊群”全文上网，被《中国核心期刊（遴选）数据库》、美国《化学文 摘》（ＣＡ）收录。 本刊主要内容是交流老年心脏病和老年多器官疾病（两个及两个以上器官相继或同时患病）的诊治经验与教训，探讨老年病的 发病机制和有效防治措施，重点报道我国在老年病研究中具有创新意义的涉及多器官疾病的临床、基础和预防方面的最新成果和经 验，努力推广老年多器官疾病的新观点、新方法、新措施和新药物。 。 本刊主要栏目有专题笔谈、述评、基础研究、临床研究、短篇论著、经验交流、临床病例讨论、综述、讲座、病例报告、科普园地等。 读者对象为广大从事医学特别是老年医学的临床、科研、教学工作者及保健人员。 本刊双月刊，大１６开本，铜版纸印刷，９６页，每册定价１２元，全年７２元。国内统一刊号为ＣＮ １１－４７８６／Ｒ 国际标准刊号为ＩＳＳＮ １６７１－５４０３，邮发代号：８２－４０８。欲订购者请到当地邮局或汇款至本刊编辑部订阅。 ・ 地址：北京市复兴路２８号《中华老年多器官疾病杂志》编辑部 邮编：１００８５３ 电话：０１０．８８２７０４９７／６８１６３２２９ Ｅｍａｉｌ：ｚｈｌｎｄｑｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ 网址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｏｄｅ３０１．ｃａ
