・１１８２・主堡焦验医堂塞壶塑§生！Ｑ旦墓≥！鲞筮！Ｑ期￡ｂｉ望』！尘丛盟，Ｑ！！！垒笪！螋！。ｙ丛２１，丛垒！Ｑ．基础实验诊断研究・冻存神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究陈君张学利江汉刘蕊郑晓莉田成瑞【摘要】目的研究冻存大鼠胚胎神经干细胞（ＮＳＣｓ）异体移植对脊髓损伤（ＳＣＩ）的修复作用。方法４５只Ｗｉｓｔａｒ大鼠于ＳＣＩ后２ｄ随机分为Ａ、Ｂ、Ｃ３组，每组１５只，分别在ＳＣＩ处注入相同体积的生理盐水、ＮＳＣｓ、低温冻存后复苏的ＮＳＣｓ。术后分别通过免疫组化和组织切片鉴定移植细胞的分化与存活、ＢＢＢ运动评分和斜板实验评定大鼠功能恢复，细胞存活率，以及评价ＮＳＣｓ低温冻存情况。结果免疫组化及组织切片显示，Ｂ、ｃ组在移植区均有ＮＳＣｓ的特异性表达ｎｅｓｔｉｎ阳性细胞存活，而Ａ组无表达；脊髓空洞面积Ａ组［（３．９±０．１）ｍｍ２］与Ｂ组［（１．２±０．３）ｍｍ２］和Ｃ组［（１．１±０．３）ｍｍ２］比较，组间差异有统计学意义（Ｆ＝４２３．９４９，Ｐ＜０．０１），而Ｂ、Ｃ组间的差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）。ＢＢＢ评分：Ａ组［（２．０士Ｏ．５）分］与Ｂ组［（１６．４±０．８）分］和Ｃ组［（１６．０±１．４）分］间的差异有统计学意义（Ｆ＝９７０．１５７，Ｐ＜０．０１），但Ｂ、Ｃ组间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；斜板实验评分：Ａ组［（３１．３±２．９）度］与Ｂ组［（４６．８±２．１）度］和Ｃ组［（４６．５±２．４）度］间的差异有统计学意义（Ｆ＝１５１．０９９，Ｐ＜０．０１），Ｂ、Ｃ组间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。低温冻存后复苏液的ＮＳＣｓ细胞存活率［（５５．９±５．２）％］与未冻存［（６５．１±３．４）％］差异无统计学意义（ｔ＝３．３３４，Ｐ＞０．０５）。结论冻存ＮＳＣｓ复苏后仍具有活跃的增殖和分化潜能，是ＳＣＩ移植治疗有价值的细胞资源。【关键词】冻存；神经干细胞；复苏；脊髓损伤；移植ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｆｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇＣＨＥＮＴｈｅｏｎＷｉｓｔａｒｒａｔｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙＪｕｎ，ＺＨＡＮＧＸｕｅ—ｌｉ，ＪＩＡＮＧＨａｎ，ＬＩＵＲｕｉ，ＺＨＥＮＧＸｉａｏ—ｌｉ，ＴＩＡＮＣｈｅｎｇ一九正ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔＰｅｏｐｌｅｏｆｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＴｉａｎｊｉｎＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇＨｏ印ｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００１２１，Ｃｈｉｎａａｕｔｈｏｒ：ＣＨＥＮＪｕｎ，Ｅｍａｉｌ：ｒｍｙｙｃｊ＠１６３．ｃｏｒｎＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆ４５ｓｐｉｎａｌ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ｉｎｔｏｃｏｒｄｗｅｒｅｉｎｊｕｒｙ（ＳＣＩ）ｂｙｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｉｌｓ（ＮＳＣｓ）．ＭｅｔｈｏｄｓＷｉｓｔａｒｒａｔｓｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ，ｗｉｔＩＩ１５ｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｔｗｏｄａｙｓａｆｔｅｒＳＣＩ，ｇｒｏｕｐＡ：０．９％ｓａｌｉｎｅｗａｔｅｒ。ｇｒｏｕｐＢ：ＮＳＣｓ，ｇｒｏｕｐＣ：ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄＮＳＣｓ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｔｉｓｓｕｅｉｎｃｉｓｉｏｎｗｅｒｅａｐｐｅａｒｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄｃｅｉｌｓｉｎｎｉｖｏ，ａｎｄｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆＢＢＢａｎｄｏｂｌｉｑｕｅｐｌａｔｅｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｅｓｔｉｍａｔｅｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆＡＴｈｅｉｎｊｕｒｉｅｄｓｐｉｎａｌｃｏｒｄＡ［（３．９±０．１）ｉｎｔ０２］，Ｂ［（Ｉ．２±０．３）Ｉｎｆｆｌ２］ａｎｄＣ［（１．Ｉ±０．３）ｍｍ２］，ｔｈｅｒｅｗａｓａｎｖａｒｉａｎｃｅｉｎｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＧｒｏｕｐＢａｎｄＣａｌｌｈａｄａｃｔｉｖｅＮＳＣｓｅｘｃｅｐｔｇｒｏｕｐ（Ｆ＝４２３．９４９，Ｐ＜０．０１），ＢＢＢｔｅｓｔ：ｇｒｏｕｐＡ［（２．０±０．５）ｍａｒｋ］，Ｂ［（１６．４±０．８）ｍａｒｋ］ａｎｄＣ［（１６．０±１．４）ｍａｒｋ］，ｔｈｅｒｅｗ８８ａｎｖａｒｉａｎｃｅｉｎｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ（Ｆ＝９７０．１５７，Ｐ＜０．０１），ｔｈｅｏｂｌｉｑｕｅｐｌａｔｅｔｅｓｔ：ｇｒｏｕｐＡ［（３１．３±２．９）ｄｅｇｒｅｅ］，Ｂ［（４６．８±２．１）ｄｅｇｒｅｅ］ａｎｄＣ［（４６．５．４－２．４）ｄｅｇｒｅｅ］，ｔｈｅｒｅｗａｇａｌｌｖａｒｉａｎｃｅｉｎｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ（Ｆ＝１５１．０９９，Ｐ＜Ｏ．０１），ｔｈｅｔｅｓｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｖａｒｉａｎｃｅｉｎｇｒｏｕｐＢａｎｄＣ（ａｌｌＰ＞０．０５），ｔｈｅｒｅｗａｇ１１０ｎｏｖａｒｉａｎｃｅｉｎｌｉ、，ｉｎｇｒａｔｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄＮＳＣｓｇｒｏｕｐ［（５５．９±５．２）％］ａｎｄＮＳＣｓｋｅｅｐｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｒｅｐｒｏｄｕｅｄｏｎｅｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ［（６５．１±３．４）％，ｔ＝３．３３４，Ｐ＞０．０５］．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．ＮＳＣｓｉｓａｋｉｎｄｏｆｖａｌｕａｂｌｅｃｅｌｌＮｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ；Ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ；ＣｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄｒｅｓｏｕｒｅｅｆｏｒｔｈｅｔｈｅｒａｐｙｏｆＳＣＩ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎＣｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ；ｓｐｉＩｌａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ；脊髓损伤后再生能力受限主要是缺乏诱导和促进神经再生的微环境，而非损伤的轴突本身不具有再生能力，人们长期以来采用不同神经细胞进行移植，在不同程度上促进了脊髓神经轴突的再生，胚胎作者单位：３００１２１天津市人民医院检验科通讯作者：陈君，电子信箱：ｒｍｙｙｃｊ＠１６３．ｃｏｍ神经干细胞（ＮＳＣｓ）作为近年来的研究热点‘ｍ３取得万方数据虫垡撞壁匡堂熬溢！塑！生！Ｑ屋差２１鲞筮！垒塑垦塾垫｛ｌ坐丛生：妣娩ｂ墼２盟§：Ｘ畦！！。丛垒！Ｑ了骄入的成果。但如何使脊髓损伤（ＳＣＩ）患者更方便、快捷地获得脊髓移植，为治疗赢得时间，降低死亡率，仍是亟需解决的重要闰题。隽魏本研究采震Ｗｉｓｔａｒ大鼠进行实验研究，为临床治疗ＳＣＩ以及构建不同类型的神经细胞库提供实验依据。材料与方法一、实验动物与分组选取成年Ｗｉｓｔａｒ大鬣４５廷，体重２００—２５０ｇ，按Ａｌｌｅｎ打击法致动物ＳＣＩ。成功标准：打击的脊髓组织水肿、出血，尾巴出现痉挛性摆动，双后肢及躯体霞缩样羚动，呈弛缓性瘫痪。ＳＣＩ表现为双后驶截瘫，小便潴留，伴腹肌麻痹，体温降低等并发症状。随机分为Ａ、Ｂ、Ｃ３组，每组１５只，于ＳＣＩ艨２ｄ分剃移植ｌＯ一生理盐求、ＮＳＣｓ爨液、低温冻存后复苏的ＮＳＣｓ悬液。但动物在实验过程中因感染、出血等原因共死亡４只，其中Ｂ组３只，Ｃ组１只。孕鼠铡备为雌雄各半，共３０只，合笼喂养２ｄ后分笼，并开始计算天数。二、胚胎ＮＳＣｓ的制备取ｌＯ只孕１４～１５ｄ的雌性Ｗｉｓｔａｒ犬鼠，乙醚吸人麻醉后，无菌条件下取出胚胎剪开头皮和软骨，分离出大脑半球钳取脑组织机械分离呈匀浆状，经２００斗ｍ滤网滤过于培养皿中，３７℃５％Ｃ０２孵育箱中过夜，５—７ｄ传代１次。观察发现第３—５代ＮＳＣｓ处于对数生长期，胞俸饱满，立体感强，霹保证冻存ＮＳＣｓ与未冻存ＮＳＣｓ具有很好的同质性，选用该代细胞进行移植或低温冻存待用。三、胚穗ＮＳＣｓ的低温保存耨复苏将处予对数生长期的细胞收集至离心管，４５０×ｇ离心１０ｍｉｎ，弃上清液，将活细胞浓度调至（１—２≥×１０６何蠢，黧入预冷瓣冻存液，充分混匀后移至冷冻管中，封翻做好标记。放入隔热的泡沫塑料盒中，置一８０℃低温冰箱中过夜，次日转入液氮罐孛保存。耩有冻襻ＮＳＣｓ均予３个秀羼取出复苏。将冷冻管迅速由液氮转入４０℃水浴中，冷冻管的顶部保持在水面以上避免污染，并不时撼动加速解冻。当缨脆将要完全解冻时，用７５％乙醇消毒棉签擦拭冷冻管。将ＮＳＣｓ转移到禽４℃预冷复苏液的试管中，４５０×ｇ离心１０ｍｉｎ，去除二甲基亚砜。将维胞置含ＮＳＣｓ培养液的培养趣中，３７℃５％Ｃ０２孵育箱中培养。四、动物实验效果评价１。动物肢俸恢复评分：所有实验动物在移植后万方数据第１、２、４、６周共观察４个时间段，在第６周处死前做ＢＢＢ运动评分Ｈｏ和斜板实验，并由专业康复运动人员按评分标准进行盲法评分（分）和记录斜叛度数（度）。２．ＳＣＩ空洞观察和免疫组化检测：取实验动物的脊髓组织承冻切片，在荧光显微镜普通低倍光镜（×１０）下观察骨髓空洞面积（目镜中１６个小方格相当予１ｒａｉｎ２）。巢蛋白ｎｅｓｔｉｎ为ＮＳＣｓ的特异性表达，ＮｅｕＮ秀神经元，ＧＦＡＰ免裤经胶藤缨胞（包括星形胶质细胞和少突胶质细胞）的特异性表达。移植术后备时间段从原人路显露Ｔ７硬膜，切除Ｔ５一Ｔ９脊椎板，取毒脊髓徽组织切片，行ｎｅｓｔｉｎ、ＮｅｕＮ及ＧＦＡＰ染色。３。细胞存活率分析：为鉴定ＮＳＣｓ冻存后是否仍保持其原有生物学特性，本研究取布满处予对数生长期的ＮＳＣｓ培养皿１０个，随机分为５组，每组２个，取细胞悬液傲台盼蓝染色，并计数活细胞，计算公式为：细胞存活率（％）＝活细稳缈（活细胞数＋死细胞数）×１００％；低温冻存复苏后ＮＳＣｓ以相同分组进行处理。五、统计学分析用ＳＰＳＳｌ３．０统计软件进行统计分析，检测数据用露±ｓ表示，多组资料比较，采用熏复测量方差分析，对时间因索及时闻因素和分组的交互作用进行评价，两组间结果比较，用ｔ检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果ｌ。动物肢体恢复评分：在移檀术薏ｌ一２髑，各组动物后肢功能恢复情况没有明显差别，但从第４周开始差异明显，至第６周时，ＢＢＢ实验评分Ａ组［（２．０士Ｑ。５＞分】低于Ｂ组［＜１６．４烹０．８）分３和Ｃ组［（１６．０４－１．４）分］，且组间差异有统计学意义（Ｆ＝９７０．１５７，Ｐ《０．０１），斜板实验Ａ组［（３１．３４－２。９）度】均低于Ｂ组［（稻．８４－２。１）度】纛Ｃ组［（４６．５±２．４）度］，组间差异亦有统计学意义（Ｆ＝１５１．０９９，Ｐ《０．０１），但Ｂ、Ｃ组间差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５），表麓ＮＳＣｓ移植能有效促进ＳＣＩ大鼠功能恢复。见表ｌ，２。２．ＳＣＩ空洞观察及免疫组化检测：移植前脊髓空漏露积为（３。８±Ｏ。２）ｍｍ２，边缘破碎（蓬ｔａ）。移植后Ｂ、Ｃ两组随着时间的延长空洞不断修复、缩小，丽Ａ组变化不明显。至第６周时，Ａ组空濑面积未觅明显变化，为（３．９±Ｏ．１）ｍｉｌｌ２，褥Ｂ组［（１．２±・１１８４・表１各移植组不同时间ＢＢＢ运动评分结果比较（分，元±５）注：（１）重复测量方差分析：Ｆ（Ｉｉｍｅ）－－２４５４．３０７，Ｐ＜Ｏ．０１，球形检验Ｍａｎｃｈｌｙ’ｓＷ＝０．２１９，Ｐ＜Ｏ．０１；此外，Ｆ（嘶。口叫ｐ）＝５０９．２９，Ｐ＜Ｏ．０１；时间因素以及时间因素和分组的交互作用的差异有统计学意义，说明ＢＢＢ评分指标有随时问变化的趋势，且时间因素的作用随着分组的不同而不同。（２）同组不同时间、同一时间不同组问比较，８Ｐ＜０．０５，“Ｐ＜０．０１表２各移植组不同时间斜板实验结果比较（度，元±ｓ）注：（１）重复测量方差分析：Ｆ（６。）＝２０３．７３４，Ｐ＜Ｏ．０１，球形检验Ｍａｎｅｌｄｙ’８形＝Ｏ．８８９，Ｐ＞Ｏ．０５；此外，Ｆ（ｔｌ。．ｍ）＝３６．１９０，Ｐ＜Ｏ．０１；时间因素以及时间因素和分组的交互作用的差异有统计学意义，说明斜板实验评分测量指标有随时间变化的趋势并且时间因素的作用随着分组的不同而不同。（２）同组不同时间、同一时间不同组间比较，。Ｐ＜Ｏ．０５，６Ｐ＜０．０１０．３）ｍｍ２］和ｃ组［（１．１±０．３）ｍｍ２］空洞面积明（图２ｃ～ｄ）；但４周后ｎｅｓｔｉｎ阳性细胞逐渐减少甚至检测不到，而ＮｅｕＮ、ＧＦＡＰ阳性的细胞一直到第６周仍可在脊髓组织中检测到。说明移植的ＮＳＣｓ可在大鼠体内进一步分化为神经元、神经胶质细胞（包括星形胶质细胞和少突胶质细胞），移植神经细胞与宿主神经细胞整合良好，移植部位周围没有出现明显胶质增生和炎症细胞浸润，植入ＮＳＣｓ在损伤区无排斥反应并与宿主融合良好。Ａ组则无以上细胞。显缩小（图１ｂ—ｄ），且组间差异有统计学意义（Ｆ＝４２３．９４９，尸＜０．０５），但Ｂ与Ｃ组间差异无统计学意义（＿Ｐ＞０．０５）。见表３。Ｂ、Ｃ组移植术后ｌ一２周可在损伤脊髓组织切片内检测到ｎｅｓｔｉｎ阳性生长良好的ＮＳＣｓ（图２ａ），ＮｅｕＮ阳性的神经元细胞呈球形、锥形、星形或梭形（图２ｂ），ＧＦＡＰ阳性星形胶质细胞呈多角形扁平或有长丝状星形和少突胶质细胞呈多角形扁平注：箭头所示的灰白色面积为损伤的脊髓空洞；ａ图为ＳＣｌ后２ｄ；ｂ图为Ａ组移植后６周；ｃ图为Ｂ组移植后６周；ｄ图为ｃ组移植后６周图１大鼠损伤脊髓空洞图（ｘ４０）表３脊髓损伤空洞修复结果比较（ｍｍ２，牙±ｓ）注：（１）重复测量方差分析：Ｆ（６ｍｅ）＝５５３．２３４，Ｐ＜０．０１，球形检验Ｍａｎｃｈｌｙ’８Ｗ＝Ｏ．９３２，Ｐ＞０．０５；此外，，（妇。ｔ∞ｏｐ）＝９１．９１ｌ，Ｐ＜Ｏ．０ｌ；时间因素以及时间因素和分组的交互作用的差异有统计学意义，说明移植后脊髓空洞测量值有随时间变化的趋势并且时间因素的作用随着分组的不同而不同。（２）同组不同时间、同一时间不同组问比较，‘Ｐ＜０．０５，６Ｐ＜Ｏ．０１万方数据生堡捡墅医堂盘查！鲤！生！Ｑ旦筮！！鲞筮！Ｑ翅￡堕垫』！坐丛鱼，堡坐！趔！：！些！！，塑些！Ｑ注：ａ图箭头所示为ＮＳＣｓｎｅｓｔｉｎ阳性；ｂ图箭头所示为神经元ＮｅｕＮ阳性；ｃ图箭头所示为星形胶质细胞ＧＦＡＰ阳性；ｄ图箭头所示为少突胶质细胞ＧＦＡＰ阳性圈２荧光染色阳性的移植神经细胞（×２００）３．冻存与未冻存组ＮＳＣｓ细胞存活率比较：冻存复苏后ＮＳＣｓ与未冻存的细胞形态无差别：细胞体饱满，立体感强周围有明显光晕，复苏后经传代的ＮＳＣｓ生长状态良好，且表达ＮＳＣｓ特异性标志ｎｅｓｔｉｎ，并在大鼠脊髓组织中存活后，继续分化为神经元和神经胶质细胞，细胞存活率分别为（５５．９±５．２）％、（６５．１４－３．４）％，二组间差异无统计学意义（ｔ＝３．３３４，Ｐ＞０．０５）。见表４。表４冻存与未冻存ＮＳＣｓ细胞存活率比较（％，牙±ｓ）讨论有研究发现，ＮＳＣｓ可能从以下几方面促进ＳＣＩ的恢复。（１）细胞替代。一方面脊髓的原发性损伤会导致脊髓内神经元及神经胶质细胞等功能细胞的损伤和死亡；另一方面ＳＣＩ后继发的病理、生理改变导致脊髓内功能细胞的进一步缺失。移植的ＮＳＣｓ能在宿主体内分化为神经元及神经胶质细胞去补充损伤和死亡的功能细胞以提供新的神经连接及再髓鞘化”Ｊ。（２）分泌多种神经营养因子促进损伤轴突再生。最新研究证实，ＮＳＣｓ在体内外均可分泌多种神经营养因子∞Ｊ，包括神经生长因子、脑源性神经营养因子和胶质源神经营养因子等。（３）作为转基因治疗的受体细胞对抗不利于ＳＣＩ的局部微环境，为神经元及神经胶质细胞，并观察到明显的后肢功能恢复。说明我们采用大鼠ＮＳＣｓ移植修复大鼠对于移植的ＮＳＣｓ在体内的迁徙、分化机制以万方数据不清楚，尚需进一步研究。因为，（１）目前大量工作仍处于实验研究阶段，而且大多在啮齿类小动物（主要为大鼠）身上获得的，尚少见大动物和高等动物的相关报道。（２）动物实验造成的ＳＣＩ与人类实际情况差别较大。（３）目前仍很难估计ＮＳＣｓ移植实验的风险，且缺乏客观、准确的评价标准，在临床功能恢复的研究定将取得突破性进展。ＮＳＣｓ的冻存、建库代表着ＮＳＣｓ临床应用发展的方向。本研究表明冻存后的ＮＳＣｓ仍能保持旺盛的，其自我复制和分化潜能得到保存，而细胞特这说明冻存后的ＮＳＣｓ仍保持特有的生物学特性。尽管在冻存过程中可能有不同程度的损伤，但冷冻参考文献［１］ＮａｋａｍｕｒａＭ，ＴｏｙａｍａＹ，ＯｋａｎｏＨ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｉｌｓｆｏｒｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ．Ｓｈｉｎｋｅｉｇａｋｕ，２００５，４５：８７４—８７６．［２］ＣｕｍｍｉｎｇｓＢＪ，ＵｅｈｉｄａＮ，ＴａｍａｋｉｓＪ，ｅｔａ１．Ｈｕｍａｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｉｌｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｌｏｃｏｍｏｔｏｒｒｅ℃ｏｖｅｒｉｎｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙｍｉｃｅ．ＰｒｏｃＮａｔ［ＡｅａｄＳＣｉＵＳＡ，２００５，１０２：１４０６９—１４０７４．［３］１ｗａｎａｍｉＡ，ＫａｎｅｋｏＳ，ＮａｋａｍｕｒａＭ，ｅｔａ１．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｅｅＵｓｆｏｒｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｍｊｕｒｙｉｎｐｒｉｍａｔｅｓ．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＲｅｓ，２００５，８０：１８２—１９０．Ｅ４］ＢａｓｓｏＤＭ，ＢｅａｔｔｉｅＭＳ，Ｂｒｅｓｎａｈａｎｊｃ．Ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇｓｙｓｔｅｍｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｎｇｔｏｌｏｅｏｍｏｔｏｒｒｅｃｏｖｅｒｙａｆｔｅｒｍｉｌｄｏｒｍｏｄｅｒａｔｅｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔ：ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｅｖｉｄｅｎｃｅａｎｄａｒｅｖｉｅｗｏｆｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ．ＲｅｓｗｒＮｅｕｒｅｌＮｅｕｒｅｓｃｉ，２００２。２０：１８９＿２１８．［５］ｈｌＰ，ＪｏｎｅｓＬＬ，ＳｎｙｄｅｒＥＹ，ｅｔａ１．Ｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅｌｙｓｅｃｒｅｔｅｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒｓａｎｄｐｍｍｏｔｅｅｘｔｅｎｓｉｖｅｈｏｓｔａｘｏｎａｌｇｒｏｗｔｈａｆｔｅｒｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ．ＥＸＰＮｅｕｒｅｌ，２００３，１８１：１１５—１２９．［６］ＳｃｈｗａｒｔｚＥＤ，ＣｈｉｎＣＬ，ＳｈｕｍｓｋｙＪｓ，ｅｔ８１．Ａｐｐａｒｅｎｔｄｉｆｆｕｓｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｉｎｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓａｎｄｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇｗｈｉｔｅｍａｔｔｅｒｃｏｒｒｅｌａｔｅｗｉｔｈｄｅｇｒｅｅｏｆａｘｏｎａｌｄｉｅｂａｃｋａｆｔｅｒｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔ．ＡＪＮＲＡｍＪＮｅｕｒｏｒａｄｉｏｌ，２００５，２６：７．１８．（收稿日期：２００８－０７－３０）（本文编辑：李建陵）试验开始前仍有很多问题需要解决。但随着ＮＳＣｓ基础理论的不断更新和发展，其应用于人类ＳＣＩ后性及存活率与未冻存的ＮＳＣｓ差异无统计学意义。保存既可以减弱移植物的免疫原性，提高移植成功率，又可为各种组织配型的干细胞库的建立及移植手术的实施提供方便。从而促进轴突功能性再生和突触的重新形成。本研究根据上述原理，将培养及冻存后复苏的ＮＳＣｓ分别植入大鼠ＳＣＩ部位，均可存活较长时间，且能分化ＳＣＩ动物模型具有潜在的研究和应用价值。及移植后宿主神经系统的变化和应答机制等目前还
