中国畜牧兽医２０１８，４５（３）：５５９ ５７０ Ｃｈｉｎａ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ＆Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｄｏｉ：１０．１６４３１，１。ｃｎｋｉ．１ ６７１—７２３６．２０１８，０３，００１ 山羊ＰＰＡＲａ基因克隆、分子特性及 组织差异表达分析 饶辽源，周靖宣，王林杰，李 利，张红平，仲 涛 （四川农业大学动物科技学院，成都６１１１３０） 摘要：试验旨在克隆山羊过氧化物酶体增殖物激活受体ｄ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ—ａｌｐｈａ， ＰＰＡＲａ）基因的ＣＤＳ区序列，分析其编码蛋白的结构与功能，并探讨其在山羊不同组织中的表达模式。采用ＲＴ－ ＰＣＲ方法扩增并克隆ＰＰＡＲａ基因ＣＤＳ编码区；通过在线软件对其一级结构、二级结构和三级结构进行生物信息 学分析；利用基因序列和编码蛋白构建系统发育树，进行系统发育进化分析；采用实时荧光定量ＰＣＲ方法检测 ＰＰＡＲｃＬ基因在简州大耳羊心脏、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏和网膜６个组织中的相对表达情况。结果表明，山羊 ＰＰＡＲａ基因ＣＤＳ区全长１ ４１３ ｂｐ，结构稳定，共编码４７０个氨基酸。生物信息学分析发现，ＰＰＡＲ￣蛋白是一种结 构较为稳定的带负电的亲水性蛋白，以ａ一螺旋和无规则卷曲为主，无信号肽和跨膜蛋白，属于膜内蛋白。蛋白序列 中总共有４９个磷酸化位点，９个糖基化位点。保守结构域中含有明显的ＤＢＤ区域和ＬＢＤ区域，蛋白结构高度保 守。三级结构预测发现其蛋白结构主要为通过长链卷曲连接的２个明显不同的结构区域，结构均以ｈｅｌｉｘ螺旋为 主。序列比对结果表明，山羊ＰＰＡＲ￣氨基酸序列与绵羊和牛的同源性最高。实时荧光定量检测结果表明， ＰＰＡＲｅ￣基因在肾脏和肝脏中表达量较高，显著高于其他组织（Ｐ＜０．０５）；在网膜组织和心脏中中度表达，显著高于 肺脏和脾脏（Ｐ％０．０５）；在肺脏和脾脏中相对低表达；说明山羊ＰＰＡＲ 基因可能与体内脂肪氧化、脂质代谢和抗 氧化应激等功能有关。试验结果为深入研究ＰＰＡＲａ基因在山羊中的生理功能和机制奠定了理论基础。 关键词：山羊；ＰＰＡＲａ基因；克隆；生物信息学；差异表达 中图分类号：Ｑ７８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１—７２３６（２０１８）０３—０５５９～１２ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ＰＰＡＲａ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｇｏａｔｓ（Ｃａｐｒａ ｈｉｒｃｕｓ） ＲＡＯ Ｌｉａｏｙｕａｎ，ＺＨＯＵ Ｊｉｎｇｘｕａｎ，ＷＡＮＧ Ｌｉｎｊｉｅ，ＬＩ Ｌｉ，ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇｐｉｎｇ，ＺＨＯＮＧ Ｔａｏ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ ６ １ １ １ ３０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｃｌｏｎｅ ｔｈｅ ＣＤＳ ｏｆ ｇｏａｔ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ—ａｌｐｈａ（ＰＰＡＲａ）ｇｅｎｅ，ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄ ｄｉｓ— ＣＵＳＳ ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ ＣＤＳ ｏｆ ＰＰＡＲａ ｇｅｎｅ ｗａｓ ａｍｐｌｉ— ｆｉｅｄ ａｎｄ ｃｌｏｎｅｄ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ，ｉｔｓ ｐｒｉｍａｒｙ，ｓｅｃｏｎｄ ａｎｄ ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｏｎｌｉｎｅ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｓｏｆｔｗａｒｅｓ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｕｓｅｄ ｔｏ ｐｅｒｆｏｒｍ ｔｈｅ ｐｈｙｌｏ— ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｓｉｘ ｔｉｓｓｕｅｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｈｅａｒｔ，ｌｕｎｇ，ｌｉｖｅｒ，ｋｉｄｎｅｙ，ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｏｍｅｎｔｕｍ，ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔ— ｅｄ ｆｒｏｍ Ｊｉａｎｚｈｏｕ Ｄａ’ｅｒ ｇｏａｔ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ＰＰＡＲａ ｂｙ Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＣＤＳ ｏｆ ＰＰＡＲａ ｇｅｎｅ ｗａｓ １ ４１３ ｂｐ ｉｎ ｌｅｎｇｔｈ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ４７０ ａｍｉ— ｎｏ ａｃｉｄｓ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ｓｔａｂｌｅ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｅｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ 收稿日期：２０１７－０９ １５ 基金项目：国家自然科学基金项目（３１５０１９３６）；四川农业大学本科生科研兴趣培养计划项目（２０１６２０３） 作者简介：饶辽源（１９９６一），男，四川南充人，学士，研究方向：动物遗传育种与繁殖，Ｅ—ｍａｉｌ：ｒｌｙ１９９６０６０２＠１６３．ｃｏｒｎ ＊通信作者：仲涛（１９８１一），男，河北保定人，博士，研究方向：动物遗传育种与繁殖，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｏｎｇｔａｏ＠ｓｉｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ５６Ｏ 中 国畜牧兽医 ｓｅｃｏｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ＰＰＡＲａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｅｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｄ—ｈｅｌｉｘ ａｎｄ ｒａｎｄｏｍ ｃｏｉｌ。ａｎｄ ９ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｇｌｙｃｏｓｙ— ｌａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ａｎｄ ４９ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｒｅｖｅａｌｅｄ．Ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｔｒａｎｓｍｅｍ— ｂｒａｎｅ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ ＰＰＡＲｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ＤＮＡ— ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｌｉｇａｎｄ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓ．Ｔｗｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｄｏｍａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ ｂｙ ａ ｌｏｎｇ ｃｈａｉｎ ｃｒｉｍｐ ｌｉｎｋ ａｎｄ ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｈｅｌｉｘ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ． ＰＰＡＲ￣ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｇｏａｔ ｈａｄ ａ ｈｉｇｈｌｙ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｗｉｔｈ ｓｈｅｅｐ ａｎｄ ｃａｔｔｌｅ．ＰＰＡＲａ ｇｅｎｅ ｍＲＮＡ ｗｅｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｐ＜ ０．０５）．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｅａｒｔ ａｎｄ ｏｍｅｎｔｕｍ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｌｏｗｅｓｔ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｎｄ ｓｐｌｅｅｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ Ｐ ＰＡＲ ｃＬ ｇｅｎｅ ｉｎ ｇｏａｔ ｍｉｇｈｔ ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ｓｕｃｈ ａｓ ｆａｔ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ，ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ａｎｔｉ—ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ．Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗｏｕｌｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｃｈ— ａｎｉｓｍ ｏｆ ＰＰＡＲｃ￣ｇｅｎｅ ｉｎ ｇｏａｔｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｇｏａｔ；ＰＰＡＲ ａ ｇｅｎｅ；ｃｌｏｎｅ；ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ 过氧化物酶体增殖物激活受体（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＰＰＡＲｓ）是指一类 能被过氧化物酶体增殖物（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａ— 为配体结合域（１ｉｇａｎｄ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ，ＬＢＤ）Ｃ１ ３］。 ＰＰＡＲａ在心肌细胞、肝脏细胞、肠细胞、肾脏近端小 管细胞和骨骼肌中表达活跃，此外在血管内皮细胞、 ｔｏｒｓ，ＰＰ）和脂肪酸等激活并产生多种效应的甾类激 平滑肌细胞、巨噬细胞、Ｔ淋巴细胞等中也有表 达 ］。ＰＰＡＲａ能够被过氧化物增殖物、脂肪酸类 素受体口］，属于类固醇受体超级家族的一员 。根 据其结构功能的不同可分为ＰＰＡＲ ０：、ＰＰＡＲ￣和 ＰＰＡＲ７ ３种亚型受体，它们均由不同的基因编码。 等天然配基和人工ＰＰＡＲ ｏ：激动剂如安妥明等药理 性配基激活，基因激活后，诱导位于启动子区域的 ＰＰＲＥ的转录，进而产生应答反应，同时还可以调节 ＰＰＡＲｓ主要通过与类视黄醇ｘ受体组成异源二聚 体，结合到过氧化物酶体增殖物反应元件上，进而引 起内部构象的改变，诱导过氧化物酶体增殖体相关 基因的表达＿３］，在脂质代谢和脂肪细胞分化上具有 重要的作用 ］。研究表明，ＰＰＡＲｓ与人体和动 物多种重要代谢疾病如糖尿病、肝病、炎症、动脉粥 硬化、肥胖和癌症的治疗有密切的联系［５。］。 与过氧化物酶体及线粒体脂肪酸８氧化相关基因的 表达 。 ＰＰＡＲａ为脂质代谢的主调节器，大量相关 基因，功能主要表现在线粒体和过氧脂肪酸氧 化、酮生成、甘油三酯代谢和胆汁合成／分泌等，在维 持心肌细胞能量代谢方面有一定的作用，且在相应 组织如肝脏、心脏内多种分泌蛋白的表达，发挥 内分泌功能＿】 ］。ＰＰＡＲａ是脂肪酸氧化酶基因的 ＰＰＡＲｓ在血管平滑肌细胞、血管内皮细胞、动脉粥样 斑块和单核巨噬细胞内均有分布，在脂质氧化活跃的 组织（如心脏、肝脏、肾脏和脂肪组织等）中表达量较 高ｌ８。 。大多数组织中ＰＰＡＲａ、ＰＰＡＲ￣和ＰＰＡＲ７共 主要转录子，通过接受外来脂肪酸配体进而产 生效应，主要作用于肝细胞，是多种分子调节机制的 关键点，在生理代谢和疾病机制中起重要作 用＿ｌ 。研究发现，当小鼠缺乏ＰＰＡＲａ并饲喂高 同表达，具有高度同源性，但每个亚型在不同组织中 表达和配体专一性存在差异，在胚胎和成人中表达模 式也不尽相同ｌ＿７ 。 脂肪的食物时，ＰＰＡＲａ表达抑制，更容易受到非酒 精性脂肪型肝炎（ＮＡＳＨ）的影响，增加脂肪肝细胞 变性和炎症的发生概率Ｉ１ 。ＰＰＡＲａ基因敲除后导 致脂质过氧化损伤，其显著增加的氧化应激导致肌 ＰＰＡＲａ是ＰＰＡＲｓ家族中发现的第一个亚型受 体，在人中由４６８个氨基酸残基组成，定位于人的第 ２２号染色体 。该基因共具有６个区域包括４个 功能区（Ａ／Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ／Ｆ），Ａ／Ｂ区位于氨基末端，含 有活化功能域ＡＦ一１（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ １），Ｃ区是 球蛋白功能紊乱，会引起心肌收缩功能紊乱等症 状 ，而心肌细胞ＫＬＦ５基因与启动子直接结合激 活下游的ＰＰＡＲａ，进而心肌能量代谢 ¨。血 ＤＮＡ结合域（ＤＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ，ＤＢＤ），Ｅ／Ｆ区 ３期 饶辽源等：山羊ＰＰＡＲ 基因克隆、分子特性及组织差异表达分析 ５６１ 红素加氧酶一１（ＨＯ一１）是一种应激反应蛋白，由氧化 ｄｏｒｆ公司；ＰＣＲ仪、荧光定量ＰＣＲ仪、ＧｅｌＤｏｃ ＴＭＥＱ１７０—８０６０全自动凝胶成像系统均购自Ｂｉｏ－ 物诱导产生，具有抗氧化作用，激活ＰＰＡＲ￣能够显 著上调酒精性肝损伤大鼠模型ＨＯ一１的ｍＲＮＡ及 蛋白表达，进而减轻氧化应激［２ 。这些现象表明， Ｒａｄ公司；ＤＹＹ－８Ｃ型电泳仪购自北京市六一仪器厂。 １．３总ＲＮＡ提取与反转录 用液氮研磨约１００ ｍｇ的肾脏组织样品，采用 Ａｎｉｍａｌ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ提取样品总 ＰＰＡＲａ对维持肝脏细胞、心脏细胞内氧化物稳态和 心肌能量代谢起重要作用。相关试验表明，碳水化 合物原件与ＰＰＡＲａ受体结合在肝脏中调节脂质代 谢，尤其是褐色脂肪的发生＿２引，在猪中ＰＰＡＲａ作为 转录基因参与脂肪酸氧化，可以导致脂肪沉 ＲＮＡ。将提取的总ＲＮＡ用２．０％琼脂糖凝胶进行 电泳检测，并采用核酸蛋白仪检测其质量与浓度，要 求Ａ２６０ ／Ａ２８０ ＞１．８。使用ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ Ｒｅａ— 积口 。说明ＰＰＡＲａ的缺乏或表达受抑，可引起一 系列与肝内脂肪酸代谢有关的蛋白质、脂肪、酶基因 的转录与合成发生异常。 除此之外，ＰＰＡＲａ受体激活后，具有调节内皮 功能、提升胰岛素耐受性及抗炎症等作用，从而发挥 抗动脉粥样硬化、调节血糖、治疗糖尿病和肝病等生 理作用【＿２引。目前，ＰＰＡＲ、ＰＰＡＲａ基因在人、小鼠、 大鼠中的研究较为深人，但有关草食动物如牛和绵 羊中的研究还较少ｌ２ ，而关于山羊ＰＰＡＲａ基因序 列分析和在不同组织中差异表达的研究鲜有报道。 鉴于此，本试验以简州大耳羊为研究对象，克隆山羊 ＰＰＡＲａ基因序列，预测分析其编码蛋白的结构与 功能，并探究其在不同组织中的表达情况，从而为 ＰＰＡＲａ基因在山羊脂肪分化、脂质代谢和抗氧化 应激功能研究提供基础资料，为进一步探讨山羊体 内脂肪代谢和抗氧化应激的机制提供参考。 １材料与方法 １．１试验动物 从四川简阳市简州大耳羊育种场随机选取３只 ３月龄无亲缘关系的健康母羊，屠宰后立即取心脏、 肺脏、肝脏、肾脏、脾脏和网膜６个组织样品。将各组 织切成１ ｃｍ３的小块，用灭菌的生理盐水冲洗后，迅 速投入液氮中冷冻，带回实验室后－－８０℃保存备用。 １．２主要试剂及仪器 Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、Ａｎｉｍａｌ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐＲＴ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ、通用 型ＤＮＡ胶纯化回收试剂盒、２×Ｒｅａｌ ＰＣＲ Ｅａｓｙ Ｍｉｘ—ＳＹＢＲ和ＳＹＢＲ＠Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ １Ｉ均购自 ＴａＫａＲａ公司；酵母提取物、２×Ｔａｑ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ和ＤＬ２０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ均购白天根生化科技 （北京）有限公司。 微量可调移液器、低温离心机均购自Ｅｐｐｅｎ— ｇｅｎｔ Ｋｉｔ进行反转录操作，将反转录获得的ｃＤＮＡ 于～２Ｏ℃保存备用，ＲＮＡ于一８０℃保存备用。 １．４引物设计及合成 根据ＧｅｎＢａｎｋ数据库中公布的ＰＰＡＲａ基因 ｍＲＮＡ序列，分别选取牛（Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ，登录号：ＮＭ一 ００１０３４０３６．１）、绵羊（Ｏｖｉｓ ａｒｉｅｓ，登录号：ＸＭ一 ０１５０９５０６５．１）、人（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ，登录号： ＣＲ４５７４３５．１）３个物种ＰＰＡＲａ基因ｍＲＮＡ序列， 对比分析其保守区域，利用Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５．０软 件设计３对引物用于ＰＣＲ扩增及克隆测序；再根据 克隆测得的山羊ＰＰＡＲ￣基因ＣＤＳ区全长序列及 看家基因￣－ａｃｔｉｎ序列，设计实时荧光定量ＰＣＲ引 物，引物信息见表１。引物均由成都擎科生物科技 有限公司合成。 １．５ 目的基因克隆与测序 采用ＲＴ—ＰＣＲ方法以ｃＤＮＡ为模板扩增 ＰＰＡ．ＲⅡ基因全长ＣＤＳ区，得到３段具有重叠区域 的ｍＲＮＡ扩增片段。ＰＣＲ扩增体系３Ｏ Ｌ：２× Ｔａｑ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ １５肚Ｌ，上、下游引物 （１０＞ｍｏｌ／Ｌ）各１ Ｌ，ｃＤＮＡ １．５ Ｌ，ｄｄＨ２ ｏ １１．５，ｕＬ。ＰＣＲ反应条件为：９５℃预变性５ ｍｉｎ； ９４℃变性３０ Ｓ，退火（退火温度见表１）３０ Ｓ，７２℃延 伸１ ｍｉｎ，３５个循环；７２℃延伸７ ｍｉｎ；１２℃保存。 ＰＣＲ产物经１．０ 琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物， 利用Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ纯化目的片 段。将目的基因产物与ｐＭＤ１９－Ｔ载体于ｌ６℃连 接２ ｈ，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ感受态细胞，挑选阳性 菌落经ＰＣＲ鉴定后送成都擎科梓熙生物技术有限 公司进行测序。 利用ＤＮＡＳｔａｒ软件和人工拼接得到ＰＰＡＲａ 基因序列。将测序结果与其他物种ＰＰＡＲａ基因 ＣＤＳ区序列（表２）进行比对，确认测序质量并得到 ＰＰＡＲａ基因ＣＤＳ区域序列信息。 ５６２ 中 国 畜 牧兽 医 ４５卷 表２其他物种ＰＰＡＲａ基因ＣＤＳ区信息表 Ｔａｂｌｅ ２ Ｃｏｄｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＰＰＡＲ旺ｇｅｎｅ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ａｎｉｍａｌｓ １．６腿ＡＲａ基因序列分析与结构功能预测 线软件（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｓｉｇ— ｎａＩ Ｐ／）进行蛋白信号肽分析；利用在线软件（ｈｔｔｐ： ｆ ．ｇｅｎｓｅｒｉｐｔ．ｃｏｍ／ｐｓｏｒｔ／ｗｏｌｆ—ｐｓｏｒｔ．ｈｔｍｌ／、 进行蛋白亚细胞定位分析；利用在线软件（ｈｔｔｐ：／／ ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｃｄｄ／ｗｒｐｓｂ． 对山羊ＰＰＡＲａ基因ＣＤＳ区进行序列分析和 蛋白生物信息结构功能预测：利用ＤＡＮＭＡＮ软件 进行序列基本分析；利用在线软件（ｈｔｔｐ：／／ｗｅｂ．ｅｘ— ｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｐｒｏｔｐａｒａｍ）进行蛋白一级结构分析；利用 ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ在线软件与Ｍｅｇａ ５．０软件进行同源 性比对分析和系统进化树构建；利用在线软件（ｈｔ— ｃｇｉ）进行蛋白序列保守结构域分析；利用在线软件 （ｈｔｔｐ：∥ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／） ｔｐｓ：／／ｎｐｓａ—ｐｒａｂｉ．ｉｂｃｐ．ｆｒ／ｃｇｉ—ｂｉｎ／ｎｐｓａ—ａｕｔｏｍａｔ． ｐｌ？ｐａｇｅ＝／ＮＰＳＡ／ｎｐｓａ—ｓｅｃｃｏｎｓ．ｈｔｍ１）进行蛋白 进行蛋白跨膜区预测；利用在线软件（ｈｔｔｐｓ：／／ ｓｗｉｓｓｍｏｄｅ１．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／）进行蛋白三级结构预测。 １．７基因检测表达 二级结构分析；利用在线软件（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ． ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＰｈｏｓ／）进行蛋白磷酸化位点分 实时荧光定量ＰＣＲ反应体系１Ｏ Ｉ ：ＳＹＢＲ＠ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ州ＩＩ ５ Ｌ，上、下游引物各０．３ Ｌ， 析；利用在线软件（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖ— ｉｃｅｓ／ＮｅｔＯＧｌｙｃ一３．１／）进行糖基化位点预测；利用在 ｃＤＮＡ模板０．６ Ｌ，ｄｄＨ２ ０ ３．８ Ｉ 。ＰＣＲ反应程 ３期 饶辽源等：山羊ＰＰＡＲａ基因克隆、分子特性及组织差异表达分析 ５６３ 序：９５℃３０ Ｓ；９５℃５ Ｓ，６０．４℃３０ Ｓ，３５个循环； 熔解曲线分析：９５℃１５ Ｓ，以０．５℃／ｓ从６５℃上升 到９５℃。实时荧光定量ＰＣＲ扩增反应在ＣＦＸ９６ ２．２ ＰＰＡＲａ蛋白结构分析 ２．２．１ ＰＰＡＲａ蛋白一级结构 利用ＰｒｏｔＰａｒａｍ ｔｏｏｌ程序预测ＰＰＡＲ 蛋白的一级结构和部分理化 性质，结果发现，山羊ＰＰＡＲｃ￣基因编码４７０个氨基 酸，分子式为Ｃ Ｈ。 Ｎ 。Ｏ 。。Ｓ ，分子质量为 荧光定量ＰＣＲ仪上进行检测。利用２ △ｃ 法分析 试验数据，并用ＳＡＳ ８．０软件的ＧＬＭ过程进行最 小二乘分析，Ｄｕｎｃａｎ氏法进行多重比较，以Ｐ＜ ５２．３ ｋｕ，等电点（ｐＩ）为５．７７，负电荷残基（Ａｓｐ＋ ０．０５为差异显著性判断标准。 ２ 结 果 ２．１ ＰＰＡＲａ基因ＣＤＳ区全长克隆与测序 以反转录得到的肾脏组织ｃＤＮＡ为模板，采用 ＲＴ—ＰＣＲ方法扩增ＰＰＡＲａ基因全长ＣＤＳ区，经 １．０ 琼脂糖凝胶电泳检测，获得片段分别长约３６７、 １ ３１７和９７３ ｂｐ（图１），与预期目的片段大小相符。 测序后得到３个片段包括全长ＣＤＳ区、部分 ５ ＵＴＲ和３ ＵＴＲ区，拼接后得到基因片段长 １ ７６１ ｂｐ。对测序结果进行分析，并与其他物种 ＰＰＡＲａ基因ＣＤＳ区参考序列进行比对，发现山羊 ＰＰＡＲａ基因ＣＤＳ区全长１ ４１３ ｂｐ，终止密码子为 ＴＡＧ，共编码４７０个氨基酸残基（图２）。将序列提 交至ＧｅｎＢａｎｋ，登录号为：ＭＦ一８０２２８９。将序列编 辑人ＤＮＡＭＡＮ软件后发现，Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ含量分别 为２５．０５ （３５４个）、２７．３２ （３８６个）、２６．７５ （３７８个）、２０．８８ （２９５个），ＧＣ含量（５４．０７ ）高 于ＡＴ含量（４５．９３％），说明编码区的ＤＮＡ双链较 为稳定。 １ Ｃ ２ Ｃ ３ Ｃ Ｍ １，ＰＰＡＲａ一１扩增产物；Ｃ，阴性对照；２，ＰＰＡＲａ一２扩增产 物；３，ＰＰＡＲｄ一３扩增产物；Ｍ，ＤＬ２０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ １，ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｆ ＰＰＡＲｄ一１；Ｃ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ；２，ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｆ ＰＰＡＲ 一２；３，ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｆ ＰＰＡＲｍ３；Ｍ， ＤＬ２０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ 图１ ＰＰＡＲⅡ基因ＰＣＲ扩增产物电泳图 Ｆｉｇ．１ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ＰＰＡＲａ ｇｅｎｅ Ｇｌｕ）为６２，正电荷残基（Ａｒｇ＋Ｌｙｓ）为５２，说明 ＰＰＡＲａ蛋白为带负电、稳定的亲水性蛋白。不稳定 系数（１１）为４７．４９，说明ＰＰＡＲ 蛋白比较稳定。平 均亲水性（ＧＲＡＶＹ）为一０．１９６，脂肪系数（ＡＩ）为 ８４．８９。ＰＰＡＲａ蛋白的氨基酸末端（Ｎ）残基为甲硫 氨酸（Ｍｅｔ），因此满足“Ｎ端学说”。 ２．２．２ ＰＰＡＲａ蛋白二级结构 利用ＮＰＳ＠在 线预测ＰＰＡＲａ蛋白的二级结构，结果见图３。由图 瑚 ｍ珊 喜３可知，ＰＰＡＲａ蛋白氨基酸序列含４８．５ｌ 一螺旋 （ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｘ）、８．５１ 延伸链（ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｓｔｒａｎｄ）、 ４２．９８ 无规则卷曲（ｒａｎｄｏｍ ｃｏｉｌ）。 ２．２．３ ＰＰＡＲ 蛋白序列保守区域与跨膜蛋白 利用ＮＣＢＩ工具预测ＰＰＡＲａ蛋白序列保守区域 （ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｄｏｍａｉｎｓ），结果显示，在ｌＯ３～１８６位氨 基酸之间存在ＤＢＤ区域（ＤＮＡ结合域），在２０３～ ４６９位氨基酸之间存在ＬＤＢ区域（配体结合域） （图４Ａ）。利用ＴＭＨＭＭ Ｓｅｒｖｅｒ ｖ．２．０分析ＰＰＡＲａ 属于非跨膜蛋白或膜内蛋白。 ２．２．４ ＰＰＡＲａ蛋白磷酸化位点预测 利用 ＮｅｔＰｈｏｓ软件预测ＰＰＡＲａ蛋白磷酸化位点，结果 发现，其磷酸化电势阈值基本上为０～ｌ，当磷酸化 电势位于红线上方即阈值＞０．５时，则该位点有可 能被磷酸化（图４Ｂ）。山羊ＰＰＡＲａ蛋白４７０个氨基 酸中，可能被磷酸化的位点共有４９个，包括２８个丝 氨酸（Ｓｅｒ）位点、１５个苏氨酸（Ｔｈｒ）位点及６个酪氨 酸（Ｔｙｒ）位点，其中丝氨酸接近磷酸电势１的比例 最大，这些丝氨酸位点被磷酸化的概率非常大，主要 集中在０和１００位氨基酸处。 ２．２．５ ＰＰＡＲａ蛋白糖基化位点预测 利用 Ｎｅｔ Ｐｈｏｓ软件预测ＰＰＡＲａ蛋白糖基化位点，结果 发现，９个糖基化位点分别位于６、７１、７３、７５、７８、 ８１、７９、８２、８４位氨基酸处，主要集中于７５位氨基酸 左右（图４Ｃ）。利用ＳｉｇｎａＬＰ ４．１程序预测ＰＰＡＲ￣ 蛋白质的信号肽，结果发现其剪切位置分值（Ｃ— ｓｃｏｒｅ）、信号肽分值（ｓ—ｓｃｏｒｅ）和Ｙ分值（Ｙ—ｓｃｏｒｅ）分 值均小于基准阈值０．５，预测山羊ＰＰＡＲａ蛋白没有 信号肽。利用ＰＳＯＲＴ预测山羊ＰＰＡＲａ蛋白亚细 胞定位结果，发现细胞质（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ）占４７．８％； ； ５６４ 中 国畜牧兽医 ４５卷 细胞核（ｎｕｃｌｅａｒ）占３Ｏ．４ ；线粒体（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ１） 占１３．Ｏ ；内质网（ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ）占 １０ ４．３ ；高尔基体（ｇｏｌｇｉ）占４．３％，由此推测ＰＰＡＲａ 蛋白可能是在细胞质中发挥作用。 ７０ ８Ｏ ９０ １００ ｌ１Ｏ １２０ ｌｌｃ＾＾Ｇ＾Ｇ＾ＴｌＴｃｆ ２０ ３０ ４Ｏ ５０ ６０ 舂ｌ翰 矗ｌ Ｇ ｉｉ嚣ｌ 套Ｔ嚣ｇ ｌ 扩Ｌ Ｓ ｐ Ｌ藏点 套Ｌ蠢Ｓ铲Ｌ Ｓ矗 Ｆ Ｌ Ｑ露鬻Ｇ Ｔ Ｉ Ｑ Ｅ Ｉ Ｓ ｌ３０ １４０ １５０ １６０ １７０ １８０ １９０ ２００ ２ｌＯ ２２０ ２３０ ２４０ 皤Ｔｌ：ｌ Ｓ Ｉ 嚣 Ｓ Ｓ ＴＴＴｌ 蜘矗点董６ 鳊 Ｓ Ｆ Ｓ Ｆ Ｔ越 磕 茹Ｇ＾蝣１％ Ｇ Ｓ瞄 Ｐ ６ Ｓ ３００ ３ｌ０ Ｔｌ盯ｌ点ｃ蝣＾ｃ＾ｏｃｃ１ＧＴｃ∞ Ｇ Ｓ Ｖ 重 蕈 静 ｆ Ｌ Ｓ ３２０ ３３０ ３４０ ｌ ∞ｃｃ ＾ Ｓ Ｓ Ｐ ３５０ ３６０ 丑童 ２５０ Ｓ Ｓ 矗 Ｓ ２６０ ２７０ ２８０ ２９０ ｌ馐 Ｐ 赢 Ｐ 鑫 Ｓ 轰譬 嚣 Ｓ Ｓ Ｓ 童 赢 ｌ＿ 辩 ∞ 越 ｅ 纛Ｉ Ｃ ６ Ｄ鬣点Ｓ露 棚 囊 ０ａＯＧ 慧城搿＝＾ ｌｌ Ｔ Ｇ ３７０ ３８０ ３９０ ４００ ４１０ ｌＩ＝ ４２０ 蠡ｆ； ４３０ ４４０ ４５０ ４６０ ４７０ ４８０ Ｃ 襄｛； ｅ 麓 嚣 擎 囊Ｒ ｔ Ｉ 羲 嚣 ｋ 警 套 巍Ｃ 黔 巍 Ｓ ｅ ｌ 嚣 麓 蕞Ｒ 麓 Ｃ Ｑ Ｃ Ｒ誉 ８５０ ８６０ ８７０ ８８０ ８９０ ９００ ９１０ ９２０ ９３０ ９４０ ９５０ ９６０ 磊ｃＧ 瞄 ∞ｃＧＴｃ＾ｏ∞＾ ｆｃＪＩ。∞瞄警Ｔ。Ｇｃｃ＾蹒∞ｃ＾．ｆ。ｃｃ埘∞ 张 ｌ０ｅ躺 翻 Ｇ 。Ｇｌｌ 鲥髓：ｃＡ 盯ｌ Ｔ Ｓ 嚣ｌ Ｔ嚣ｌ＿Ｔ纛 ＾ Ｓ Ｉ ｐ ６ Ａ ｌ＿ 辩霜Ｑ ｌ 麓 Ｇ Ｙ岂点Ｉ １３３０ 蟊 嚣耩赢 １３４０ ｌＧ Ｖ １３５０ ＾蝎＾｜ 麟ｌ １３６０ １３７０ ％ １３８０ １３９０ １４００ １４１０ ｅ ＣＴＯ； ＾ ∞５＾ｃ∞粼ｌ６ｃ ｃ＾ 蛾ｌ囊ｃ蝣直Ｉ； ＾１喀Ｉ＾ｃ Ａ Ｔ嚣 Ｓ驺 点赢ｋ联 Ｌ Ｑ嚣 黧Ｙ飘 黛 肄 下划线，保守结构域；＊，终止密码子 Ｕｎｄｅｒｌｉｎｅ，Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｄｏｍａｉｎｓ；＊，Ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｅｎｃｏｄｉｎｇ 图２ Ⅱ基因ＣＤＳ区序列全长和编码氮基酸 Ｆｉｇ．２ ＣＤＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＰＰＡＲｎ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｛蹲 跷辽源 ：ＪＩ』 Ｐ，’ Ｒａ基 克降、分ｒ特性及 织羞蚌表达分析 ５６５ ５０ １００ １５Ｏ ２００ ２５０ ３００ ３５０ ４００ ４５０ ｊ｛｛宽线段．兄姚ｌ』！ｌＪ醛『ｆ１１；宽线段．延伸链： 线段．。螺旋 Ｉ＇ｈｃ ｗｉ（１ｃｓｔ ｎｌＯｌｌｌ·Ｒａ，１（ｉ（）１３ｌ ｃｏｉｌ；Ｗｉｄｅ 、ｇｉｌｌｅｉｌｌ，Ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｌ ｒＤｉ］ｄ：Ｎａｒｒｏｗ ｓｅｇｎ１（ ｎｆ．Ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｘ 图３ ＰＰＡＲ￣蛋白二级结构预测 ｌ ｉ￡．３ Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＰＰＡＲａ ｐｒｏｔｅｉｎ ７５ １５０ ２２５ ６００ ３７５ ４５０４７０ ｚｉ 洲 ｂ ｎｄｉ ｅ ｒ ｌ ｌ ｌ ｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓ ｉｔｅＬ一…一．，ｎｇＳｉｔ‘土±乱 一 ＾ Ｕ一一 ｎ６ ｓｉｔｅ ｕ １ｍｅｒ １ ｔｎ ｔｅｒ■薯 ａｃ～一ｅｌ一 目｜＾ 一｜＿鹾蓖 豳霞黼鞠豳豳豳黧麓黼豳圈豳嘲疆黼黼ｌ”ｉｅｔｅｍ茸 ｃｒｏｄ１ ｅｍ ｎｒ。 １ ｔ ｔｅｒ ａＣｅ ｌ譬ｒｅ ｏｏ ｇ唑 “ｅ 。ｌ ＮＲｎＢ ｌｊｉｋｅ ｓｕｐ．ｅｒｆａ…￣ｉｌｙ～ 一 ＢＯ。 ｅｒｆ８Ｉ］【ｌｙ Ａ ｑ） ０ 求 ０ ５０ ｌＯ０ １５Ｏ ２００ ２５０ ３００ ３５０ ４００ ４５０ 位置Ｐｏｓｉｔｉｏｎ Ｂ ｈＴｈ ＿＿ ； Ｓ ｅ ｒ ｅ ｅ Ｏ Ｏ Ｓ ｒ ｙｒ ＿１一 — ｛ｒ ｎ Ｓｈ １．１ ０ 一— ０ ｅ ｅ ｅｄ ｎ ｎ ｎ１ ． —一 Ｕ ∽ 一 ：酱 一 一一一 ０ ５Ｏ ｌＯＯ ｌ５Ｏ ２００ ２５０ ３００ ３５０ ４００ ４５０ 位置ＰｏｓｉｔｉＯｉｌ Ｃ 图４ ＰＰＡＲａ蛋白保守结构域（Ａ）、磷酸化位点（Ｂ）和糖基化位点（Ｃ）预测 Ｆｉｇ．４ ｒｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｄｏｍａｉｎｓ（Ａ）一ｐｈｎｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ（Ｂ）ａｎｄ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ（（、）ｏｆ ＰＰＡＲａ ｐｒｎｔｅｉｎ ２．２．６ Ｉ Ｉ’ＡＲ篮 级结构 利 Ｓｗｉｓｓ ｔ ｍ ｃ 预测ＰＰＡＲａ赁ｈ二级结构．结果衷明，其蛋 Ｉ ｉ 主安分为２个叫 不同的结构 域．主要以 …（１～Ｊ 氦揍酸为分 【）（＝域，通过无规则卷曲连 接．ｉｆ＇ｊ：个结构均以ｈｅｌｉｘ螺旋为主（罔５）。 ２．３ 物种间ＰＰＡＲａ氨基酸同源性比对及系统进 化树分析 利刑 ３１ Ｉｆ１ ＢＩ ＡＳＴ对山羊ＰＰＡＲ ｏｃ氨基酸 Ｊ 州（ 录号：ＭＦ ８０２２８９）与牛（臀求号：ＮＭ 【）（）１ ０３ ｒ１０３６．１）、绵 （ 求号：ＸＭ ０ｌ ５０９５０６５．１）、 图５ ＰＰＡＲａ蛋白三级结构预测 野牛（ 录 ：ＸＭ０１ ０８３７６１ ８．１）、驴（ 录号：ＸＭ Ｆｉｇ．５ Ｔｈｅ ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＰＰＡＲａ ｐｒｏｔｅｉｎ ５６６ ０１＿８６４ Ｌ４ ６５．１）、人（ 求 ：ＣＰ，４５７４３５．１）、骆驼（登 求 ：ＮＭ００６１ ７６６６２．２）、猪（登录号：ＮＭ ２．４ ＰＩ＇ＡＲ￣ｔ基因在山羊不同组织中的表达情况 以ｆ３ “ｉｌ 作为１人Ｊ参 ．利川实时荧光定 （）（）１ ０，ｔ ４５２６．１）、人鼠（ 录号：ＮＭ ０１ ３１ ９６．１）、小鼠 （ 求号：ＮＭ（）Ｏｌ １ １３，１ １ ８．１）及猕猴（登求号：ＸＭ ＰＣＲ检 １，’Ｐ／、Ｒ 』ｌ ｆ人Ｉ Ｉ【Ｊ ｙ－６币ｆＪ绀 ｌ（Ｈｒ 崆、 Ｆ 脏、心且ｎ 、脾叭、网膜干¨‘ 脏）ｒＩｌ的ｍＩ４ＮＡ丧达键．结 果见罔７。… ７ Ｉ｛Ｊ‘ ．ｊ ＰＡＲａ蚺 ｍＲＮ． 肾 ０１ ５１ ５０５５２．１）ＰＩ ＡＲａ氨恭腋序列进行同源性比 刈‘。 利川Ｍｅｇａ ．０卡勾建系统进化树．结果见 ６。 … ６¨Ｊ 知．ＩＩＩ ＰＩ ．ＡＲａ氦基酸序列与绵 秆ｌ牛 的¨源 最高．亲缘炎系由专近． 骆驼、猪次之．符合 物种进化规律和分类 。 脏和ＩＨ：ｔｉｆ！ＩＩｌ 达 较高．傲｛ＩＩ ｆ 、 ｒ 其他组织（Ｐ０ ０．０１）；６－： ０ ｆＩＩ心脏Ｉｉ１太丛艟 蔷Ｉ ｊ：肺毗ｆ１１啤凡噍 （，】＜０．０５）； ￣ｌ，ｌｉ叭ｆ¨『】，Ｉｔ叭ｌｆ 艟较低。 人ｆｌｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ 猕猴Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ 小鼠Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌＵＳ 人鼠Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕ 驴Ｅｑ ＵＵＳ ａｓｉｎｕｓ 猪Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ 骆驼ＣａｍｅｌＵＳ ｆｅｒｕｓ 牛Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ 野，Ｉ：Ｂｉｓｏｎ ｂｉｓｏｎ ｂｉＳＯ 绵羊ＯｖｉＳ ａｒｉａｓ ＩＩＩ羊Ｃａｐｒａ ｈｉｒｃｕｓ 图６ ｐＰＡＲｕ氨基酸序列系统进化树 Ｆｉｇ．６ ＰｈｙｌｎＲｅｎｅｌｉｃ ｔｒｅｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ Ｉ）ａｓｅｄ ｏｎ ＰＰＡＲａ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ 专 罩 肺脏Ｌｕｎｇ ｆ，Ｊ ／ｆ 川小 肝脏Ｌｉｖｅｒ 脾脏Ｓｌｐｅｅｎ肾脏Ｋｉｄｎｅｙ嘲膜Ｏｍｅｎｔｕｍ心脏Ｈｅａｒｔ ； 大 ｉ彳母丧，＇：燕蚌搬｛ｆ１｛ｌ （， 、ｏ．【１１）； 冲 中¨Ｍ ｊ，：ｆ：ｊ＿ 爪 太爪謦异 孛｝（，） （）．０５）； ４ ｛Ｉｌ！． ’（，’ 、０．ｏ ） Ｖａｌ【ｌ【 ｗｉｔｈ（１ｉｆｆｅｒｅｍ ｓｍａｌｌ ｌ（。ｔｉｅｒ ｓ ＬＩｔ）ｅｒｓｃｒｉＩ）Ｉｓ ｎ１ｃａ Ｔ１ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒ￣、１１ （，’ 、 ００５）：Ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｖ、ｒＬ—Ｉ１ｔ Ｌ？ａｔ）ｌｔ，Ｉｌ ｌ Ｌ １ｔ（、ｒ Ｉｌ ．Ｉ儿’ｒｓ（’ｒｉｐ１ ＩＩＩＣ２ｔＩ１ ｅｘｌ ｒｃｒｌ１ ｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅ，。ｃＤｃｅ（Ｐ＜二（）．０１）；Ｗｈｉｌｅ ｗｉｌｈ“１（一ｓ；ｌｎ１ ｌｅｔＩ【 ｒ Ｓｔｉ［）（、ｒ 【，ｌ‘ｉｐｔｓ Ｉ１ｌｔ ｆｌｎ ｌＩＯ ｉｇｌ１ｉｆｊ ‘、 …１（１ｉｆｆ【、Ｆｅｌ１（ 【、（Ｐ （）．０５） 图７ ＰＩ＇ＡＲｃｔ基因在山羊不同组织中的表达量 Ｆｉ ７ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＰＰＡＲａ ｇｅｎｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｇｏａｔｓ 维持体１人Ｊ ＩＩ！ 的” 质代谢卡¨脂肪铽化功能．并 宵 ３ 讨 论 Ｉ Ｉ’ＡＲａ足脂胁卡ｆ１父代谢渊 的重要物质，能够 一定的抗瓴化Ｊ、 激功能，与脂质代 卡『１火的疾病尤 其是动脉俐硬化、糖 病和ＪＪＩ 痫等的发，ｆｉ 有重要 ３期 饶辽源等：山羊ＰＰＡＲａ基因克隆、分子特性及组织差异表达分析 ５６７ 的联系＿２ 。目前，对草食动物尤其是山羊ＰＰＡＲａ 基因的研究报道较少，探究该基因对草食动物相关 脂质代谢疾病的研究具有重要意义。本试验参考 牛、绵羊和人的ＰＰＡ尺ａ基因保守序列设计引物，运 用ＲＴ—ＰＣＲ扩增技术得到了山羊ＰＰＡＲｃ￣基因 基化位点大致位于７５位氨基酸附近。蛋白磷酸化 是蛋白最重要的修饰方式，是指通过蛋白激酶的作 用获取底物ＡＴＰ的磷酸基的过程，在细胞信号转 导等过程中起重要作用ｌ３ 。蛋白糖基化是蛋自修 饰的一种重要方式，主要是指在相关酶的控制下，让 蛋白质或脂质附加上糖类的过程，主要发生于内质 ＣＤＳ区的完整编码序列，利用生物学软件对其进行 相关的生物信息学预测，同时采用实时荧光定量 ＰＣＲ技术对其在山羊不同组织中表达情况进行 检测。 本研究将山羊ＰＰＡＲａ基因与其他１Ｏ个不同 物种进行比对，发现碱基数目差异不大，说明该基因 比较保守，构建的系统进化树和氨基酸比对结果表 明，山羊ＰＰＡＲａ与绵羊和牛的同源性最高，亲缘关 系最近，符合生物进化特性。信号肽预测发现， ＰＰＡＲａ蛋白无信号肽，说明该结构不具有把蛋白质 引导到不同膜结构的亚细胞器内的功能。跨膜预测 发现其无跨膜蛋白，说明其蛋白成分在膜上分布较 少，没有发生跨膜现象。亚细胞定位预测发现其主 要在细胞质内发生作用，因此综合推测其为膜内蛋 白，与已有研究相符，说明ＰＰＡＲａ蛋白可通过接受 外来传人的信号，参与细胞内的代谢，从而维持 细胞的脂质稳态等 。蛋白结构预测发现，其蛋白 保守结构域中１０３～１８６位氨基酸之间存在ＤＢＤ区 域（ＤＮＡ结合域），在２０３～４６９位氨基酸之间存在 ＬＢＤ区域（配体结合域）。ＤＮＡ结合域形成可以特 异识别并结合ＤＮＡ的结构，结合已有证据表明，山 羊中该部位属于ＰＰＡＲａ蛋白中功能区的Ｃ区ｌ１ ， 主要参与机制和刺激基因表达等，该部位主要 含有赖氨酸、精氨酸和组氨酸等极性带正电氨基酸。 预测所得的ＰＰＡＲａ配体结合域主要位于编码蛋白 后段，该部分属于ＰＰＡＲａ蛋白功能区的Ｅ／Ｆ区，发 挥配体结合功能，说明山羊该部位符合被相关的酶 或其他激活因子激活进而参与身体生理代谢反应的 特性口 。该配体激活因子除了过氧化物增殖物之 外，还有脂肪酸如花生四烯酸、亚油酸等长链不饱和 脂肪酸、聚合和氧化型脂肪酸，新人工开发的 ＰＰＡＲ 激动剂及吲哚美辛和其他非甾体类抗炎药 也可以使其产生一定激活效应ｌ＿５ 。但由于配体间 差异，一些配体与ＰＰＡＲｎ结合后途径不同，导 致构象发生改变，进而产生不同的抑制或激活效 应 ，且不同物种间配体的结合、激活和生理功能 也有差异Ｌ３ 。磷酸化位点预测发现，其磷酸化位点 共为４９个，主要位于前１００位氨基酸，氨基酸糖基 化位点预测表面存在９个明显的糖基化位点，且糖 网。蛋白质经过糖基化作用形成糖蛋白，能够抵抗 消化酶的作用、赋予蛋白质传导信号和使某些蛋白 正确折叠，对调节细胞功能具有重要作用＿３ 。根据 结构域预测，这些位点属于ＰＰＡＲａ的４个功能区 中前段的Ａ／Ｂ区，该部位含有活化功能域ＡＦ一１ （ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ １）口引，主要发挥活化蛋白产生 效应等功能。因此，推测山羊ＰＰＡＲ ａ蛋白该部分 主要为活化功能部位，该区域活化之后，将引起相关 的信号传导，使蛋白构象发生改变，产生后续代谢活 动。三级结构预测发现ＰＰＡＲ ａ蛋白结构主要分为 ２个明显不同的结构区域，通过无规则卷曲连接，而 该连接部分主要为５５～ｉ００位氨基酸，与活化部位 重叠，预测该部位与相应的结合、保护、活化功能紧 密相关。总体上由于蛋白的修饰使得蛋白功能更加 复杂，三级结构的进一步盘绕折叠使其结构更加稳 定，功能也更加完善。 研究表明，ＰＰＡＲ 基因在小鼠的心脏、肝脏、 肾脏、骨骼肌和脂肪组织中表达量较高口 ，在绵羊 的大小网膜组织等脂肪中有一定表达ｌ＿３引，同时在人 体内研究也较多，但是在山羊中的组织表达情况鲜 有报道［３ 。本试验通过实时荧光定量ＰＣＲ技术对 ＰＰＡＲａ基因在山羊不同组织中表达情况进行检 测，发现ＰＰＡＲ 基因在山羊的６个组织中均有一 定的表达，但是不同组织之间的表达差异较大，可能 与不同组织中的脂肪氧化活跃度和脂质代谢有 关口 。研究发现，在肾脏中配体结合ＰＰＡＲａ后能 够维持肾脏的脂质和葡萄糖稳态，具有肾脏保护作 用，同时抵抗血脂异常和胰岛素异常，有助于预防糖 尿病并发症等肾脏疾病的发生，特别是１型糖尿 病 。在动脉壁细胞中主要通过抗氧化应激及血 脂调节途径，让该受体与特殊的抗动脉粥样硬化和 抗炎作用紧密联系，产生潜在的心脏保护效应，同时 还发挥一定的抗氧化应激作用Ｌ７］，同时模型试验表 明，ＰＰＡＲａ基因在抗心脏肥大和其他心脏疾病上 如冠心病有相当重要的作用ｌ＿３ ∞］。ＰＰＡＲａ基因主 要脂肪酸氧化和脂质代谢，最新研究发现，其在 肝脏中有具有特殊的抗炎作用，在非酒精型脂肪肝 预防、酮类代谢和胆汁分泌中均具有重要功能＿４ ¨。 ５６８ 中 国畜牧兽医 ４５卷 组织中这些功能和结构的特异性都揭示了ＰＰＡ．Ｒａ 基因在肾脏、肝脏和心脏中表达相对明显的原因。 网膜属于内脏中的脂肪组织，基因表达相对中等，说 明该基因在该部位可能发挥一定功能，但具体 ｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，１９９３，９０（４）：１４４０—１４４４． ［４］ ＳＣＨ０ＯＮＪＡＮＳ Ｋ，ＳＴＡＥＬＳ Ｂ，ＡＵＷＥＲＸ Ｊ．Ｔｈｅ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（ＰＰＡＲＳ） 机制尚待研究；而该基因在脾脏和肺脏中表达相对 较低，推测该部位脂肪氧化和脂质代谢可能不活跃。 由此预测，在山羊不同组织中ＰＰＡＲ￣基因的差异 表达可能与其脂肪氧化、脂质代谢和抗氧化应激等 重要生理功能有关，但目前对山羊中这些组织的 ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ｅ Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ， １９９６，１３０２（２）：９３－１０９． ［５］ ＷＡＹＭＡＮ Ｎ Ｓ，ＥＬＬＩＳ Ｂ Ｌ，ＴＨＩＥＭＥＲＭＡＮＮ Ｃ．Ｌｉｇａｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅ— ｃｅｐｔｏｒ－ＰＰＡＲ—ａ ｒｅｄｕｃｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔ ｓｉｚｅ［Ｊ］． ＰＰＡＲａ基因研究较少，具体功能和机制尚不 清楚。本试验主要为ＰＰＡＲａ基因在山羊脂肪分 化、脂质代谢和抗氧化应激功能后续研究提供基础 资料，为进一步探讨其具体脂肪代谢和抗氧化应激 的机制提供参考。 ４ 结 论 山羊ＰＰＡＲａ基因ＣＤＳ区全长１ ４１３ ｂｐ，编码 ４７０个氨基酸，是一种结构较为稳定的带负电的亲 水性蛋白。蛋白二级结构中主要存在ａ一螺旋和无 规则卷曲，无信号肽和跨膜蛋白，属于膜内蛋白，蛋 白主要存在于细胞质中，主要在细胞内发挥功能。 蛋白序列有４９个磷酸化位点，包括２８个括丝 氨酸位点、１５个苏氨酸位点及６个酪氨酸位点，存 在９个糖基化位点，结构域中含有明显的ＤＢＤ区域 和ＬＢＤ区域，各位点与发挥相应功能紧密相关。三 级结构主要分为２个明显不同的结构区域，通过无 规则卷曲连接，２个结构均以ｈｅｌｉｘ螺旋为主。与绵 羊和牛的同源性最高，蛋白结构高度保守。山羊 ＰＰＡＲａ基因在６个内脏组织中的表达量存在显著 差异，在肾脏和肝脏中表达量较高，在心脏和网膜中 中度表达，而在肺脏和脾脏中表达量很低。 参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）： ［１］ＳＣＨＭＩＤＴ Ａ，ＥＮＤＯ Ｎ，ＲＵＴＬＥＤＧＥ Ｓ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎ ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｅｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅｒｅ— ｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｔｈａｔ ｉｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ａ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ ａｎｄｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓｌ，Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ— ｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ａ ），１９９２，６（１０）：１６３４—１６４１． ［２］ ＩＳＳＥＭＡＮＮ Ｉ。ＧＲＥＥＮ Ｓ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｅｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｂｙ ｐｅｒｏｘｉ— ｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９０，３４７（６２９４）： ６４５—６５Ｏ． ［３］ ＧＥＡＲＩＮＧ Ｋ Ｌ，ＧＯＴＴＬＩＣＨＥＲ Ｍ，ＴＥＢＯＵＬ Ｍ， ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ—ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ＿ａｃｔｉ— ｒａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ｒｅｔｉｎｏｉｄ Ｘ ｒｅｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｅｄ一 Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｍｏｎｉｔｏｒ Ｉ ｒ ｎｆ ０ ￡ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ． ２Ｏｌ５，８（７）：ＢＲ２４３一ＢＲ２４７． ［６］ ＰＡＷＬＡＫ Ｍ，ＬＥＦＥＢＶＲＥ Ｐ，ＳＴＡＥＬＳ Ｂ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＰＰＡＲａ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｎｏｎ—ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅｌ，Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２０１５， ６２（３）：７２０—７３３． ［７］ ＹＯＵＳＳＥＦ Ｊ，ＢＡＤＲ Ｍ Ｚ．ＰＰＡＲｓ：Ｈｉｓｔｏｒｙ ａｎｄ ａｄ— ｖａｎｃｅｓ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃｌｉｆｔｏｎ， ～Ｊ），２０１３，９５２：１－６． ［８］ ＫＥＲＳＴＥＮ Ｓ，ＤＥＳＶＥＲＧＮＥ Ｂ，ＷＡＨＬＩ Ｗ．Ｒｏｌｅｓ ｏｆ ＰＰＡＲｓ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ Ｅ Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０００， ４０５（６７８５）：４２１－４２４． ［９］ 杜琛，李金泉，陈秀娟．绒山羊不同肌肉组织及肌内 脂肪细胞的基因表达分析ＦＪ］．中国畜牧兽医，２０１６， ４３（２）：２８５—２９５． ＤＵ Ｃ，ＬＩ Ｊ Ｑ，ＣＨＥＮ Ｘ Ｊ．Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｕｓｃｌｅｓ ａｎｄ ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ ａｄｉｐｏｅｙｔｅｓ ｉｎ ｃａｓｈｍｅｒｅ ｇｏａｔ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ＆Ｖ 一 ｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１６，４３（２）：２８５—２９５．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１ｏ３ ＢＩＳＨｏＰ—ＢＡＩＬＥＹ Ｄ．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ— ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］． Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０００，１２９（５）： ８２３—８３４． ［１１］ ＫＬＩＥＷＥＲ Ｓ Ａ，Ｆ０ＲＭＡＮ Ｂ Ｍ，ＢＬＵＭＢＥＲＧ Ｂ， ｅｔ ａ１．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏ１ｉｆｅｒａｔｏ卜ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ￣Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｙ’Ａｍｅｒｉｃａ，１９９４， ９１（１５）：７３５５ ７３５９． ［－１２］ ＭＡＲＸ Ｎ，ＤＵＥＺ Ｈ，ＦＲＵＣＨＡＲＴ Ｊ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｐｅｒｏｘｉ— ｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅ— ｓｉｓ：Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４，９４（９）：１１６８． ［１３］ ＭＡＮＧＥＬＳＤ０ＲＦ Ｄ Ｊ，ＴＨＵＭＭＥＬ Ｃ，ＢＥＡＴ０ Ｍ， ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｄｅｃａｄｅｌ＇Ｊ］．（ ｚｚ，１９９５，８３（６）：８３５—８３９． ，１１４］ ＴＳＵＹＯＳＨＩ Ｇ，ＪＯＣ卜Ｙ０ＵＮＧ Ｌ，ＡＫＩ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ａｃｔｉ— ３期 饶辽源等：山羊ＰＰＡＲ 基因克隆、分子特性及组织差异表达分析 ５６９ ｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ Ｄｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ— ａｌｐｈａ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｂｏｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｘ— ｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２Ｏ１１，５２（５）：８７３—８８４． ［１５］ ＫＥＲＳＴＥＮ Ｓ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｓｙｓｔｅｍｓ ｂｉｏｌ— ｏｇｙ ｏｆ ＰＰＡＲ ａｌｐｈａ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２０１４， ３（４）：３５４—３７１． ［１６２ ＭＡＤＲＡＺ０ Ｊ Ａ，ＫＥＬＬＹ Ｄ Ｐ．Ｔｈｅ ＰＰＡＲ ｔｒｉｏ：Ｒｅｇｕ— ｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｅｎｅｒｇｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃａｒ— ｄｉｏｌｏｇｙ，２００８，４４（６）：９６８—９７５． ［１７］ ＳＥＲＲＡＮＯ Ａ，ＰＡＶＯＮ Ｊ，ＤＩＥＯＯ Ｙ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｏｌｅｏｙｌｅ— ｔｈａｎｏｌａｍｉｄｅ，ａ ｌｉｇａｎｄ ｏｆ ｔｈｅ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ— ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｌｐｈａ，ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｏｘｉ ｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｔｗｅｅｎ ２０［Ｊ］．Ｏｂｅｓｉｔｙ＆ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２００８，４（１）：７６—８４． ［１８］ ＢＲＯＣＫＥＲ Ｃ Ｎ，ＹＵＥ Ｊ，ＫＩＭ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ— ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＰＡＲＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｘｃｌｕｓｉｖｅｌｙ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ａｇｏ— ｎｉｓｔ～ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗｉｔｈｏｕｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｆｒｏｍ ｎｏｎｐａｒｅｎｃｈｙｍａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓ— ｉｏｌｏｇｙ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ａｎｄ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１７， ３１２（３）：Ｇ２８３一Ｇ２９９． ［１９］ ＡＢＤＥＬＭ＿ＥＧＥＥＤ Ｍ Ａ。Ｙ００ Ｓ Ｈ，ＨＥＮＤＥＲＳ０Ｎ Ｌ Ｅ， ｅｔ ａ１．ＰＰＡＲ ａｌｐｈａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｍａｌｅ ｍｉｃｅ ｆｒｏｍ ｈｉｇｈ ｆａｔ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ［Ｊ］． Ｐ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＮｕｔｒｉｔｉｏｎ，２０１１，１４１（４）：６０３—６１０． ［２Ｏ］ ＧＵＥＬＬＩＣＨ Ａ，ＤＡＭＹ Ｔ。ＬＥＣＡＲＰＥＮＴＩＥＲ Ｙ， ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＰＰＡＲａｌｐｈａ一卜ｍｉｃｅＥＪ］．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓ— ｉｏｌｏｇｙ Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００７， ２９３（１）：Ｈ９３一Ｈ１Ｏ２． ［２１］ ＤＲ０ＳＡＴ０Ｓ Ｋ，ＰＯＬＬＡＫ Ｎ Ｍ，ＰＯＬ Ｃ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒ— ｄｉａｃ ｍｙｏｃｙｔｅ ＫＬＦ５ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｐｐａｒａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃａｒｄｉａｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１６， １１８（２）：２４１－２５３． ［２２］ ＢＡＲＴＥＲ Ｐ Ｊ，ＲＹＥ Ｋ Ａ．Ｉｓ ｔｈｅｒｅ ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｆｉｂｒａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎ— ｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１）：３９—４６． ［２３］ ＩＩＺＵＫＡ Ｋ，ＷＵ Ｗ，Ｈ０ＲＩＫＡＷＡ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｆｅｅｄｂａｃｋ ｌｏｏｐｉｎｇ ｂｅｔｗｅｅｎ ＣｈＲＥＢＰ ａｎｄ ＰＰＡＲ ａｌｐｈａ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇ ｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｂｒｏｗｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅｓ［Ｊ］． ＥｎｄｏｃｒｉｎｅＪｏｕｒｎａｌ，２０１３，６０（１Ｏ）：¨４５—１】５３． ［２４］ ＳＴＡＣＨＯＷＩＡＫ Ｍ，ＳＺＹＤＬＯＷＳＫ１ Ｍ，ＦＬＩＳＩＫＯＷＳ— ＫＩ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ３ ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｉｇ ＰＰＡＲ ｇｅｎｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｉｔｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４，９２（６）：２３６３ ２３７１． ［２５］ ＥＳＭＡＥＬＩ Ｓ，ＡＬＬＡＭＥＨ Ａ。ＳＯＬＥＩＭＡＮＩ Ｍ。ｅｔ ａ１． Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ａｌｂｕｍｉｎ ａｎｄ ＰＰＡＲ－ａｌｐｈａ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ— ｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｐｒｏｆｉｌｅ ｄｕｒｉｎｇ ｄｉｆ— ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ－ ｌｉｋｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，２０１４， ３２（５）：４１０—４１９． ［ｚ６３ 张青青，许厚强，陈伟，等．贵州地方黄牛不同组织 中ＰＰＡＲ７基因表达水平研究［Ｊ］．中国畜牧兽医， ２０１７，４４（１）：３８—４３． ＺＨＡＮＧ Ｑ Ｑ，ＸＵ Ｈ Ｑ，ＣＨＥＮ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓ ｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＰＰＡＲ７ ｇｅｎｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ Ｏｕｉｚｈｏｕ ｃａｔｔｌｅ ｒｅｓｏｕｃｅｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄ ｒｖ＆ ｔｅｒｉ 口ｒｖ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１７，４４（１）：３８—４３．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［２７］ ＨＵ Ｘ。ＮＡ０ Ｋ，ＧＵ０ Ｒ，ｅｔ ａ１．ＰＰＡＲｄ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｒａｎｓ——ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ——ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｔｅａｔ０ｈ印ａｔｉｔｉｓ［Ｊ＿．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ— ｉｓｔｒｙ，２０１７，３９：７７． ［２８２ Ｄ０ＮＧＩＯＶＡＮＮＩ Ｐ，ＶＡＬＥＮＴＩ Ｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｎｏｎａｌ ｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ￣Ｊ］．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ。２０１６，６５（８）：１０２６． ［２９］ Ｉ ＥＨＭＡＮＮ Ｊ Ｍ，ＬＥＮＨＡＲＤ Ｊ Ｍ，０ＬＩＶＥＲ Ｂ Ｂ， ｅｔ ａ１．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ａｒｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｎｏｎ－ ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏ— ｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９７，２７２（６）：３４０６—３４１０． ［３Ｏ］ ＰＡＷＬＡＫ Ｍ。ＬＥＦＥＢＶＲＥ Ｐ，ＳＴＡＥＬＳ Ｂ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＰＰＡＲａ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２０１５， ６２（３）：７２０． ［３１］ ０ＳＷＡＬ Ｄ Ｐ，ＢＡＬＡＮＡＲＡＳＩＭＨＡ Ｍ，Ｌ０ＹＥＲ Ｊ Ｋ， ｅｔ ａ１．Ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｕｒｉｎｅ ｐｅｒｏｘｉ— ｓｏｍｅ ｐｒｏ１ｉｆｅｒａｔｏｒ＿ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｌｐｈａ ｌｉｇａｎｄ ｓｐｅ— ｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１３，６４（９）： ２３５４—２３６５． ［３２］赵鹏，徐霞红，周立分，等．磷酸化蛋白质分析［Ｊ］． 化学传感器，２０１１，３１（１）：３－９． ＺＨＡＯ Ｐ，ＸＵ Ｘ Ｈ，ＺＨ０Ｕ Ｌ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ￣Ｊ；．Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｅｎｓｏｒｓ，２０１１， ３１（１）：３－９．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［３３］董炳梅，王金良，张春玲，等．蛋白质的糖基化作用及 其在生物制药中的应用［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１２， ３９（１１）：６２—６６． Ｄ０ＮＧ Ｂ Ｍ，ＷＡＮＧ Ｊ Ｌ，ＺＨＡＮＧ Ｃ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｇｌｙｃｏ— ｓｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｈａｒｍａｃｙ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ＆Ｖｅｔｅｒｉｎａ— ｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２，３９（１１）：６２—６６．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［３４］ ＦＲＡＮＣＩＳ Ｇ Ａ，ＡＮＮＩＣＯＴＴＥ Ｊ Ｓ，ＡＵＷＥＲＸ Ｊ． ＰＰＡＲ－ａｌｐｈａ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｖａｓｃｕｌａｒ ５７Ｏ 中 国畜牧兽医 ４５卷 ｔｉｓｓｕｅｓ［Ｊ］．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００３，２８５（１）：ＨＩ—Ｈ９． ｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｍｙｏｆｉｌａｍｅｎｔｓ ｉｎ ａ ｐｒｅｓ— 高中元，袁亚男，等．ＰＰＡＲ“和ＰＰＡＲ 基因在 ［３５］ 林嫱姑，ｓｕｒｅ ｏｖｅｒｌｏａｄ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ＨｅａｒｔＣｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１７，３１２（４）：Ｈ６８１． 不同脂尾型绵羊脂肪组织中的发育性表达研究［Ｊ］．畜 牧兽医学报，２０１２，４３（９）：１３６９—１３７６． ＬＩＮ Ｐ Ｐ，ＧＡＯ Ｚ Ｙ，ＹＵＡＮ Ｙ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰＰＡＲ“ａｎｄ ＰＰＡＲ７ ｍＲＮＡ ｉｎ ａｄｉｐｏｓｅ ［３９］ ＣＨＡＮＧ Ｈ，ＷＡＮＧ Ｑ，ＳＨＩ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＤａｎＱｉ Ｐｉｌｌ ｏｎ ＰＰＡＲｄ，ｌｉｐｉｄ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］． Ｂｍｃ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ＆Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１６， ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆａｔ—ｔａｉｌｅｄ ｓｈｅｅｐ￣Ｊ］．Ａｃｔａ Ｖｅｔｅｒｉｎａ— ｒｉａ ｅｔ Ｚｏｏｔｅｃｈｎｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ，２０１２，４３（９）：ｌ３６９—１３７６． （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［３６］ ＴＡＮＧ Ｂ，ＬＩ Ｂ，ＱＩＡＮ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａ— ｎｉｓｍ ｏｆ ｈＰＰＡＲａ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＲＳＣ Ａｄｖａｎｃｅｓ，２０１７， ７（２８）：１７１９３—１７２０１． ［３７３ ＣＡＬＫＩＮ Ａ Ｃ，ＧＩＵＮＴＩ Ｓ，ＪＡＮＤＥＬＥＩＴ ＤＡＨＭ Ｋ Ａ， ｅｔ ａ１．ＰＰＡＲ—ａｌｐｈａ ａｎｄ—ｇａｍｍａ ａｇｏｎｉｓｔｓ ａｔｔｅｎｕａｔｅ ｄｉａ ｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｏｕｓｅ［Ｊ］．Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｄｉａｌｙｓｉｓ，Ｔｒ以 ｓ声ｚⅡ，ｚｆ ０ ， ２００６，２１（９）：２３９９－２４０５． ［３８］ ＫＡＲＡＭ Ｃ Ｎ，ＷＡＲＲＥＮ Ｃ Ｍ，ＨＥＮＺＥ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｅｒ一 １６（１）：１０３． Ｌ４ｏ］ ＳＴＥＣ Ｄ Ｅ，ＪＯＨＮ Ｋ，ＴＲＡＢＢＩＣ Ｃ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ＰＰＡＲｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｌｉｐｉｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］． ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１６，１１（４）：ｅＯｌ５３４２７． ［４１］ ＱＩＮ Ｓ，ＹＩＮ Ｊ，ＨＵＡＮＧ Ｋ．Ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｉｐｉｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｂｙ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ＰＰＡＲ￣ａｎｄ ＳＲＥＢＰ—ｌｃ ｉｎ Ｌ ０２ ｃｅｌｌｓＥＪ］． Ｌｉｐｉｄｓ，２０１６，５１（７）：ｌ一９． （责任编辑晋大鹏）
