2015年CLSI药敏试验标准引入Carba NP试验

检测碳青霉烯酶

我国微生物实验室药敏试验均遵循美国临床与实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）制定的药敏试验标准。CLSI2015年药敏标准（M100-S25）的最大改变之处在于引入Carba NP试验和流行病学cut off值的概念。本文将重点推介Carba NP试验，以供实验室参考。 Carba NP确证试验是一种肠杆菌科、铜绿假单胞菌和不动菌属细菌中碳青霉烯酶的表型检测方法。该试验采用比色法，目前主要用于流行病学研究或感染控制，尚不推荐作为临床常规使用。研究表明，Carba NP试验在检测KPC、NDM、VIM、IMP、SPM和SME型碳青霉烯酶方面具有较好的敏感性（>90%）和特异性（>90%）。

1. Carba NP试验试剂配制说明（表1）。

表1. Carba NP试验试剂的配制

名称

配制过程

储存

1年或不超过各成分保质期

10 mM七水硫酸锌1)称量1.4g ZnSO4×7H2O 溶液 2)加入500ml试剂级纯水

3)混合，室温保存

0.5%酚红溶液

1)称量1.25g粉红粉末 2)加入250ml试剂级纯水 3) 混合，室温保存 4)使用前混匀

0.1 N氢氧化钠溶1)将20ml 1N NaOH加入180ml试剂级1年或不超过各成分保质期 液 纯水中

2) 室温保存

Carba NP试剂A1)取25-50ml烧杯，将2ml 0.5%酚红2周或不超过各成分保质期溶液 溶液加入到16.6ml试剂级纯水中 （溶液应为红色或橙色，其

他颜色均不可使用） 2)加入180ml 10mM硫酸锌溶液

3)使用0.1N NaOH溶液（或10% HCl）

调整pH值为7.8±0.1

4)4-8℃小瓶保存，避免长时间光照

Carba NP试剂B1)计算B液的需要量，需考虑每株待最多3天（4-8℃） 溶液（A液+6mg/ml测菌100ml/管、质控菌株和未经处理亚胺培南） 的试剂质控。如检测两株待测菌，阳

性和阴性对照、未经处理的试剂质控，共需500ml B液。

2)称量约10-20mg亚胺培南粉末。建议至少称量10mg粉末。将实际称重量除以6，以计算所需加入的A液量。

2.Carba NP试验的结果解读（图1）

1年或不超过各成分保质期

图1.管“a”（A液未加亚胺培南）和管“b”（B液加入亚胺培南）的颜色反应比较 结果解释：

管“a”：溶液A（作为内质控） 红色或红-橙色 红色或红-橙色 红色或红-橙色

橙色、浅橙色、深黄色或黄色

管“b”：溶液B 红色或红-橙色 浅橙色、深黄色或黄色 橙色 任何颜色

结果解释

阴性，非碳青霉烯酶产生株 阳性，碳青霉烯酶产生株 无效 无效

3.检测碳青霉烯酶的试验比较见表2

表2. 用于流行病学研究或感染控制目的检测碳青霉烯酶相关试验的比较 细菌

改良Hodge试验

Carba NP试验

其他(如分子检测)

对1种或1种以上碳青霉烯类不敏感的肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌和不动杆菌属是否产生碳青霉烯酶；检测改良Hodge试验和Carba NP试验阳性菌株的碳青霉烯酶类型。 除检测是否产生碳青霉烯酶外，亦可检测碳青霉烯酶类型

对1种或1种以上碳青霉烯对1种或1种以上碳青霉类不敏感的肠杆菌科细菌 烯类不敏感的肠杆菌科细

菌、铜绿假单胞菌和不动杆菌属 易于操作；无需特殊的试剂快速 或培养基

1)假阳性：产生ESBL或AmpC酶合并孔蛋白缺失的菌株；2)假阴性：偶尔出现（产NNDM金属酶菌株）；3)仅用于肠杆菌科细菌

优势 局限性

1)需要特殊的试剂；2)某1)需要特殊的试剂和仪器；2)只对靶些菌株检测结果无效；3)基因特异；3)对未检测的特异性碳青无法检测某些碳青霉烯酶霉烯酶基因可出现假阴性 （如染色体编码的OXA型碳青霉烯酶）