ICS 67.160.20
X51 分类号：
T/CBIA ×××-201× Beverage microbiological examination
（ membrane filtration method）
团体标准 饮料中微生物的检测（滤膜前处理法）
201×-××-××发布 中国饮料工业协会 发布
201×-××-××实施 T/CBIA ×××—201×
前 言
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国饮料工业协会提出。
本标准由中国饮料工业协会团体标准技术工作委员会归口。 本标准起草单位： 本标准主要起草人：
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T/CBIA ×××—201×
饮料中微生物的检测（滤膜前处理法）
1 范围
本标准规定了饮料（饮用天然矿泉水除外）中菌落总数、霉菌和酵母计数、大肠菌群计数的膜过滤测定、计数方法。
本标准适用于可过滤样品的测定。
本标准可作为平板计数检测方法稀释度选择的补充方法。 2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 47.1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则
GB 47.2 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 GB 47.3 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数 GB 47.15 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 GB 7101 食品安全国家标准 饮料
GB 8538 食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法
SN 1607 进出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法 疏水栅格滤膜法
中华人民共和国药典2015年版 3 原理
滤膜是一种微孔薄膜，当一定量的样液通过滤膜时，细菌、霉菌和酵母等微生物被截留在滤膜上。然后将滤膜贴于相应的培养基上培养，计数滤膜上的菌落数并进行相应确认试验，即可相应测得该样品的菌落总数、霉菌和酵母、大肠菌群等微生物数量。 4 定义
可过滤样品 filtrable sample
可在一定时间内通过滤膜过滤的样品原液或稀释液。
可过滤样品包括可完全过滤的液体饮料样品和可完全溶解过滤的溶解稀释后的固体饮料、饮料浓浆样品。
可过滤液体饮料样品取样量不少于10mL；可完全溶解稀释的固体饮料、饮料浓浆样品溶解后检测量不少于10mL。 5 实验室要求
应符合GB 47.1的规定。
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6 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：
6.1 无菌滤膜：微孔薄膜，直径47mm~50mm，孔径为0.45μm（根据过滤样品的特性选择适宜材质的膜片）。 6.2 过滤装置。
6.3 真空泵或隔膜泵等。
6.4 恒温培养箱：36±1℃，28±1℃。 6.5 抽滤瓶或废液瓶。 6.6 无菌无齿镊子。 6.7 天平：感量0.1g。 6.8 均质器。
6.9 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度），10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 6.10 无菌瓶：容量500mL。
6.11 无菌培养皿：直径50mm~90mm。 7 培养基和试剂
符合GB 47.2、GB 47.3、GB 47.15的相关规定。 8 检验程序
检验程序见图1。
检样 液体样品：取样量≥10mL 固体或饮料浓浆样品：25g（mL）样品+225mL稀释液，均质 10倍稀释 选择1-3个适宜稀释度的样品均液，各取≥10mL样液过滤 将滤膜移放在培养基上 培养基选择、培养及验证： 菌落总数：GB 47.2 大肠菌群：GB 47.3第二法 霉菌和酵母：GB 47.15 菌落计数
结果报告 图1检验程序
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9操作步骤 9.1 样品的制备
9.1.1 液体样品：混匀，待用。
9.1.2 固体饮料和饮料浓浆样品：称取25g(mL)样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1:10的样品均液。
9.1.3 根据对样品污染状况的估计，选择1-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可为原液）抽滤检测，每份样品的抽样量不少于10mL。 9.2 过滤
9.2.1将灭菌的过滤装置连接，用无菌无齿镊子夹取无菌滤膜边缘部分，正面向上，贴放在已灭菌的滤床上，放上无菌滤杯并固定。
9.2.2 无菌吸取不少于10mL待测样至滤杯内，打开真空泵或隔膜泵的电源进行抽滤，当全部样液过滤后，使用不少于15mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水至滤杯，抽滤。抽滤完成后关闭真空泵或隔膜泵电源，取下滤杯，用无菌镊子移取滤膜。
9.2.3 将正面向上贴于相应的培养基平板上，平铺并避免在滤膜和培养基之间产生气泡。 9.2.4 每批次使用的磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水需进行空白对照试验。 9.3 培养与验证
9.3.1 菌落总数参照GB 47.2执行
9.3.2 大肠菌群计数参照GB 47.3第二法执行。 9.3.3 霉菌和酵母参照GB 47.15执行。 10结果报告 10.1 计算方法
10.1.1 选取菌落数在150CFU以内，无蔓延菌落生长的平板计数。以过滤膜片上的菌落数记为检测结果，若所有稀释度的样品（包括液体样品原液）平板上均无菌落生长，则记录为：＜1乘以最低稀释倍数。
10.1.2 当滤膜上有较大片状菌落生长时，则此平板结果不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板记录菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数；大于150CFU的可记录为多不可计。
10.1.3 当滤膜上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 10.1.4 当滤膜边缘或平板上有菌生长时，不计入菌落数。 10.2 报告
10.2.1 若滤膜上均无菌落生长，则结果报告为＜1CFU/mL（g）。
10.2.2 若滤膜上的菌落数＜食品安全标准的m要求，则结果报告为实测值或＜m。 10.2.3 若滤膜上的菌落数＞食品安全标准的m要求，则需重新按照GB 47相应检验计数方法进行实验。
10.2.4 若空白对照有菌落生长，则此次检测结果无效；
10.2.5 若膜片以外的培养基平板上有菌落生长，则存在检测污染，此次检测结果无效；
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10.2.6 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。 11其他
使用滤膜前处理法检测饮料中微生物，应定期按照GB 47对应的方法进行比对。
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附录A
（资料性附录） 检测结果报告示例
A.1以液体饮料中“菌落总数”检测结果进行举例。GB 7101《食品安全国家标准 饮料》中关于“菌落总数”的规定如表A1：
表A1 菌落总数限量 项目 菌落总数（CFU/g或CFU/mL） 采样方案及限量 n 5 c 2 m 102 M 104 A.2若抽滤液体原10mL，滤膜上无菌落生长，则检测结果为＜1CFU/10mL，结果报告为＜1CFU/mL；
A.3 若抽滤液体原液10mL，滤膜上菌落数小于m值（如78CFU），则检测结果为78CFU/10mL，结果报告为78CFU/10mL或＜100CFU/mL；
A.4 若抽滤液体原液10mL，滤膜上菌落数105CFU，则检测结果为105CFU/10mL，结果报告为＞100CFU/mL。此种情况下，需按照GB47对应方法进行检测、报告。
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