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石斛中总生物碱和多糖的含量测定

来源：尔游网

・426・中国药事2002年第16卷第7期

表2　样品的含量测定结果

批号

200001042000102220010305

样品取量

g215778215342215637

峰面积值

683162168222566686839

胡椒碱的含量

mg6512183651126318361

X󰁫mg

RSD

省力,且提取结果与药典方法一致。

412　采用高效液相色谱法测定六味木香散中荜茇的含量,其结果的精密度,重现性较好。结果准确可靠。

参考文献12172781120

4　讨论

411　本文采用超声振荡20min提取,比较省时,

中国药典1一部,2000:414中国药典1一部,2000:188石斛中总生物碱和多糖的含量测定李亚芳　张晓华　孙国明

(浙江省杭州市第一人民医院　310006)

中图分类号:R28411　　文献标识码:A　　文章编号:1002-7777(2002)07-0426-03　　中药石斛原植物为兰科石斛属(Dendrobium)多种植物的茎,具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳之功效。虽然石斛的化学成分的研究较多,但对各种石斛所含成分的异同情况及其主要药用成分并没有明确的定论,以至于将各种石斛的功效混同起来,给石斛的质量评价及临床应用带来困难。

自1932年日本人首先分离得到石斛碱(Dendrobine)后,陆续从石斛中提取分离出十多种生物碱。而传统认为质重、嚼之粘牙、味甘、无渣者为优,并有报道石斛的生理活性与多糖含量有关[1]。因此,近几年来人们对石斛成分的研究多集中于生物碱[2]及多糖[3]。

金钗石斛(D.nobile)和铁皮石斛(D.candium)是《中国药典》收载的两个石斛品种,也是研究最多的品种。本文以酸性染料比色法测定两者的总生物碱含量,以苯酚-硫酸法测定两者的多糖含量,并比较两者所含化学成分的差异,为石斛的质量评定提供依据。

1　材料、仪器与试药111　材料

金钗石斛(产自四川合江);铁皮石斛(产自浙江)。112　仪器与试药

7230型紫外分光光度计(上海分析仪器厂);pH415缓冲液(012mol・L-1,pH=4的邻苯二甲酸氢钾,用012mol・L-1氢氧化钠调至pH=415);0104%溴甲酚绿溶液(称取溴甲酚绿4010mg,加100mlpH415缓冲溶液溶解,滤过即得);0101mol・L-1氢氧化钠无水乙醇溶液;石斛碱对照品(分析纯,浙江省医学科学院提供);苯酚试剂(苯酚200g,加入铝片012g和碳酸氢钠011g蒸馏,收集182℃馏分。称取17g,加水150g混匀,溶解即得,置棕色瓶中,放入冰箱备用);其他试剂为分析纯。2　方法与结果211　总生物碱的含量测定21111　标准曲线的制备

中国药事2002年第16卷第7期

精称石斛碱对照品1mg,置100ml容量瓶,加氯仿至刻度。精取110、210、310、410、510ml分别置于分液漏斗中,用氯仿稀释至1010ml,加入pH415缓冲液510ml和0104%溴甲酚绿溶液210ml,剧烈振摇3分钟,静置30分钟,氯仿层通过经氯仿浸泡处理并干燥的药棉滤过。取续滤液510ml,加0101mol・L-1氢氧化钠无水乙醇溶液110ml,摇匀。以氯仿1010ml,同法操作,作为空白对照,于620nm处测得吸收度。回归方程:A=-0101700+

μ0101035C(r=019993),石斛碱量在918～4910g范围内呈线性关系。

21112　显色稳定性试验

按标准曲线项下方法操作,于氯仿提取液加碱释放染料后,间隔5、15、30、60、120min测其吸收度。需加盖进行测定,加入碱后,在30min内显色稳定,故需及时测定。21113　精密度实验

精取石斛碱对照品溶液,连续进样5次,RSD为019%。21114　回收率实验取已知含量的金钗石斛5份,精密加入石斛碱对照品溶液,按样品测定方法测定,计算回收率,见表1。

表1　石斛碱回收率实验

样品含

加入生物

测得总生物回收率平均回收率RSDμ碱量(g)

216118213014205914213219214714(%)10513991193191810111(%)(%)・427・

表2　样品测定结果

品　种金钗石斛

　　铁皮石斛

批　号

123123

平均百分含量(%)

0145660145280146720102901025570102579

RSD(%)

310215217414315312

212　多糖的含量测定21211　多糖的提取精制

)取各石斛粗粉50g,加入石油醚(60～90℃250ml,回流提取1小时脱脂。过滤,挥干溶媒,

以80%乙醇回流提取1小时,趁热过滤,挥干溶媒,加入蒸馏水750ml回流提取2次,每次1小时,趁热过滤,减压浓缩至150ml,用011%活性碳脱色,过滤,加入95%乙醇使溶液含醇80%,静置过夜,分出沉淀物溶于蒸馏水,Sevag法脱蛋白。上清液如上述醇沉,沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤。将沉淀再如上脱色、醇沉得精制品供分析用。

21212　标准曲线的制备

精称105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品100mg,置100ml容量瓶中,用蒸馏水溶解、定容。精取10ml于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容即得。每

μμ10l含葡萄糖1g。精取011、012……017ml,分别置于容量瓶中,加蒸馏水使成210ml,各加苯酚试剂110ml,摇匀,迅速加入硫酸510ml,摇匀,放置5分钟,置沸水浴中加热15分钟,冷水迅速冷却至室温。另以蒸馏水210ml同法操作,作为空白对照,在波长490nm处测吸收度。回归曲线:A=-01008143+0101350C(r=019990)。可见葡萄糖μ在4195～34165g范围内呈线性关系。21213　显色稳定性试验

μμ生物碱(g)碱量(g)

11301298011591498011391801154180115612980　

　9918　　　317　

21115　样品的测定

精取各种石斛粗粉015g,用适量氨水湿润,密封放置30分钟,精密加入氯仿1010ml,置水浴上加热回流2小时,冷却后称重,补足失重,过滤。金钗石斛:精取续滤液110ml于10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,摇匀,从中吸取210ml置25ml容量瓶中,加氯仿稀释至刻度,摇匀,取10ml置分液漏斗中(稀释125倍),作为样品液。铁皮石斛:精取续滤液210ml于分液漏斗中,加氯仿液810ml(稀释5倍),作为样品液。将各样品液按标准曲线项下同法操作。同时精密量取石斛碱对照品溶液210ml置分液漏斗中,同法操作,测得吸收度,计算总生物碱含量,结果见表2。

精取葡萄糖标准溶液011、012、013ml,分别加蒸馏水使成210ml,各加苯酚试剂110ml,按标准曲线项操作,每隔5、10、30、60、120、180、240min测定吸收度。结果表明该显色在4小时内稳

定。

21214　换算因素的测定

精称60℃干燥至恒重的铁皮石斛多糖和金钗石斛多糖各10mg,分别置于100ml容量瓶,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。分别精取两种多糖的贮备液013ml,按标准曲线项下操作,测定吸收度。另精取葡萄糖标准溶液013ml(含葡萄糖

・428・

μ30g),同法操作,求出两种石斛多糖溶液中的葡萄糖浓度,按下式计算换算因素f,结果见表3。μ多糖溶液的浓度(g・ml-1)f=

μ多糖溶液的葡萄糖浓度(g・ml-1)×稀释因素

表3　各石斛多糖的换算因素

样品液葡萄糖标准品溶液　

铁皮石斛多糖溶液　金钗石斛多糖溶液　

样品重(mg)　1010210130

A012150115701137

中国药事2002年第16卷第7期

表5　金钗石斛、铁皮石斛的多糖含量

品　种金钗石斛　　铁皮石斛

　　批　号

123123平均百分含量(%)

316963176831810221562216922135RSD(%)

μC(g・ml-1)

141851116691463

f11211633

219

2142142152122133　讨论

311　测定方法考察

31111　酸性染料比色法测定总生物碱

21215　精密度实验

精称葡萄糖标准溶液,连续进样5次,RSD为

119%。

21216　回收率实验

精称约015g金钗石斛粗粉6份,分别用氯仿提

取2、3小时,测得总生物碱含量分别为014566%、014616%,两者无显著差异,可见2小时即提取完

取已知含量的金钗石斛01120g,精密加入石斛

多糖27mg,按样品测定方法测定,计算,结果见表4。

表4　回收率实验结果

样品含多糖量(mg)

2619628154271092710327155

加入多糖量

(g)010272010275010267010271010273

全。此外,影响测定结果的主要因素有振摇的剧烈程度、氢氧化钠无水乙醇液的加入量。振摇需剧烈以便离子对提取完全。而氢氧化钠无水乙醇液可能通过影响溶液的pH而使显色发生差异,给实验结果带来误差。31112　苯酚-硫酸法测定多糖含量

硫酸水解过程是测定的主要因素。据实验,水浴15分钟,过程已完全,超过20分钟,吸收度明显下降。可能由于条件加剧,生成的糠醛衍生物继续分解或发生聚合而影响与苯酚的缩合显色。此外用水提两次,分别测得第一次水提液多糖含量为22156%,第二次水提液不能检出多糖,可认为水提1小时提取完全。312　根据实验,金钗石斛的总生物碱含量远高于铁皮石斛。据报道,金钗石斛是石斛中总生物碱含量最高的品种。这与《本草正》《、增补本草备要》所记载的相同。

根据金钗石斛和铁皮石斛中生物碱和多糖含量的差异,我们认为两者功效各有侧重点。由此可见,传统认为质重、嚼之粘牙、味甘、无渣者为优的品质评价标准,或将生物碱作为质量指标都有一定的科学性,但也有片面性。由于石斛种类繁多,其成分和含量迥异,因而我们只有通过对药用成分的研究及确证才能制定出合理、科学的质量评价标准,从而避免商品石斛功效混同的局面。

参考文献

123

测得总多糖回收率量(mg)

55194561095216257115551

平均RSD(%)回收率(%)(%)10615　　1001295161111110219

10313　

　512

21217　样品的测定

精称60℃恒重的各石斛粗粉01250g,置圆底烧

)脱脂,加入80%乙醇100ml,瓶,用石油醚(60～90℃

回流提取1小时,乘热过滤。药渣用80%热乙醇8ml洗涤3次,再用85ml蒸馏水回流提取1小时,乘热过滤,用热水洗涤药渣和烧瓶,冷后在250ml容量瓶中以水定容。分别精取金钗石斛多糖供试液110ml、铁皮石斛多糖供试液013ml,按标准曲线项下操作,测定吸收度。同时精取葡萄糖标准溶液013ml,同法操作,按下式计算样品中多糖的含量,结果见表5。

Cs・D・f・V多糖含量(%)=×100%

μCs(g/ml):供试液中葡萄糖的浓度;

D:供试液的稀释因素;f:换算因素

V(ml):供试液的体积;

李满飞,徐国均,平田义正,等1中药石斛类多糖的含量测定1中草药,1990,21(10):10

金蓉鸾,孙继军,张远名,等111种石斛的总生物碱的测定1南京药学院学报,1981,1:9

黄民权,黄步汉,蔡体育,等1铁皮石斛多糖的提取、分离和分析1中草药,1994,25(3):128

μW(g):供试液的重量

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