中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集
犬瘟热病毒临床流行野毒株F蛋白信号肽区分析
王凤雪，闫喜军*，柴秀丽，吴
威，邵西群，罗国良，张海玲，易
立，赵建军
(中国农业科学院特产研究所，吉林吉林132109)
根据GenBank上发表的犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白基因(F)序列，设计引物扩增F蛋白部分信号肽区，片段长369bp。对2005年～2007年收集的河北、辽宁和山东等地的犬瘟热阳性的水貂、狐、貉实质脏器、血液、尿液等样品进行扩增，获得了13个CDVF蛋白部分信号肽区基因片段。所有片段克隆入T载体进行测序，序列分析发现，CDV野毒F蛋白该区段核苷酸与氨基酸序列与目前我国使用疫苗株CDV3及其他国内外疫苗株比较存在较大差异，与CDV3对应区段的核苷酸同源性在80.7%～83.2%之间，而推导的对应氨基酸序列同源性只有.8%～71.3%；而与我国分离野毒MS01及标准毒株A75/17有较高的同源性。F蛋白信号肽区序列比对、潜在的N联接糖基化位点NRT和氨基酸疏水性的比较结果，给我们提供一个信息就是，CDV野外分离株与疫苗株在F蛋白信号肽功能上有所不同。推测分离野毒F蛋白信号肽序列的变化导致功能发生变化，是野毒和疫苗株毒力不同的一个原因。本研究为CDV遗传变异和分子流行病学提供理论数据。
犬细小病毒的分离鉴定及核苷酸序列分析
易
立，程世鹏，闫喜军，柴秀丽，罗国良，张海玲，王凤雪，赵建军
(中国农业科学院特产研究所，吉林吉林132109)
犬细小病毒属于自主复制性细小病毒科，细小病毒属，猫细小病毒亚群。犬细小病毒(CPV)对于犬及犬科动物来说都是一个重要的病原，它能引起急性肠炎，白细胞减少，呕吐，以及幼犬的心肌炎等病症。
本研究旨在探究犬细小病毒的流行和变异情况，通过对南京某宠物医院疑似犬细小病毒病例进行病毒分离，分离出一株犬细小病毒，经形态学、理化学、生物学和分子病毒学等鉴定：病毒能在CRFK细胞上生长，并产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变；病毒粒子呈立体对称，直径为20～24nm，无囊膜，抗氯仿，耐酸，耐热；能凝集猪红细胞，不能凝集人、鸡、豚鼠、兔的红细胞，并能被已知的犬细小病毒阳性血清所抑制。用犬细小病毒(CPV)特异性引物对病毒进行PCR扩增，能够扩增出CPV特异性片段。动物实验表明，试验组犬均出现细小病毒症状。该细小病毒分离株被CPV/nj01/06。
对所分离的犬细小病毒核苷酸进行核苷酸序列
分析，根据GenBank公布的CPV基因序列，设计两对引物对犬细小病毒的5'端和3'端进行扩增，经测序拼接后，得到长约4600bp并涵盖所有阅读框架的基因组。对由核苷酸序列推导的非结构蛋白NS1分析发现：NS1蛋白显示出略带酸性的特征，整段蛋白以α螺旋为主，且无规律性的出现折叠和转角。蛋白N端与C端显示出较强的亲水性特性。同样对结构蛋白VP2分析发现，VP2蛋白主要存在2段明显的强亲水性区域，1个位于内部(340～420位氨基酸)，分析是潜在跨膜区；另1个位于N端(5～30位氨基酸)，为潜在信号肽序列。通过参考其他CPVVP2基因序列构建CPVVP2序列核苷酸系统发生树，通过该发生树发现，CPV/nj01/06株与其他细小病毒序列同源，并与中国、越南、中国、日本的犬细小病毒分离株VP2基因序列距离较近，而与美国，新西兰分离株的距离较远。此外，通过对犬细小病毒CPV/nj01/06株VP2蛋白关键氨基酸位点对比分析发现：CPV/nj01/06株属于犬细小病毒2a亚型(CPV-2a)。
-576-
